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益生菌添加于鸡饲料中可以促进生长性能、减少炎症、平衡肠道菌群、预防病原菌以及提高免疫功能等。而目前益生菌菌种较少,鸡源的菌种更少,研究鸡源益生菌的益生特性,比较不同来源益生菌的益生效果具有重要意义。因此,本研究拟从贵州林下生态鸡种瑶鸡肠道中分离筛选优质益生菌菌株,为林下养鸡产业用高效能益生菌制剂的研制打下基础。1.潜在益生菌株的分离筛选采集贵州林下生态鸡养殖常用鸡种瑶鸡的肠道内容物,分离肠道菌株,检测分离菌株对胆盐和酸环境的耐受特性,并对具有耐受性的分离菌进行鉴定,随后通过生长特性、产酸特性、抑菌试验、黏附试验、药敏试验及产酶试验综合评估分离菌株的体外益生特性和安全特性。结果显示:从瑶鸡肠道中分离出43株乳酸菌和芽孢杆菌疑似菌,分别经耐胆盐和耐酸处理筛选出7株对酸和胆盐环境耐受的分离菌株,经菌落形态、革兰氏染色镜检、16S r RNA基因序列鉴定为:枯草芽孢杆菌Y1、地衣芽孢杆菌Y2、乳酸杆菌R1、海氏肠球菌R2、乳酸杆菌R3、乳酸杆菌R4和发酵乳杆菌R5。乳酸菌R1、R2、R3、R4均具有较强的产酸和抑菌能力;7株分离菌均能黏附Caco-2细胞,其中海氏肠球菌R3黏附能力最高;仅枯草芽孢杆菌Y1对常见的9种抗生素敏感,且能同时产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶。结果表明,成功从瑶鸡肠道分离筛选出1株体外性能优良的鸡源枯草芽孢杆菌Y1,可用于后续动物体内益生特性研究。2.鸡源枯草芽孢杆菌体内益生特性研究测定体外性能优良的鸡源枯草芽孢杆菌对鸡只生长性能、免疫球蛋白水平、肠道形态、消化酶活性、养分表观消化率、肠道微生物组成的影响,进一步评估分离菌株在瑶鸡体内的益生特性。结果显示:体内试验中,I组空白对照组灌胃0.5 m L无菌PBS,II组灌胃等量浓度为2.0×10~8 CFU/m L的牛源枯草芽孢杆菌N1,Ⅲ组、IV组、V组分别灌胃等量浓度分别为2.0×10~7 CFU/m L、2.0×10~8CFU/m L、2.0×10~9 CFU/m L的鸡源枯草芽孢杆菌Y1。所有组别瑶鸡生长性能无显著差异（P＞0.05）;与对照组I相比,II、III、IV、V组瑶鸡血清免疫球蛋白Ig G、Ig M的含量显著提高（P＜0.05）,II、III、IV、V组组间血清免疫球蛋白Ig G、Ig M的含量差异不显著（P＞0.05）;与对照组I相比,IV组与II组空肠绒毛高度、隐窝深度比（V/C）显著增加（P＜0.05）,III、V组绒毛高度、隐窝深度比（V/C）则无显著变化（P＞0.05）;与对照组I相比,II、III、IV、V组瑶鸡十二指肠、空肠、回肠内容物中总蛋白酶、α-淀粉酶、脂肪酶的活性均显著提高（P＜0.05）;与对照组I相比,II、III、IV组粗蛋白表观消化率均显著提高（P＜0.05）,II、III组全钙养分表观消化率均显著降低（P＜0.05）,IV和V组全钙养分表观消化率组间差异均不显著（P＞0.05）;高通量测序分析表明:在门水平上,厚壁菌门和拟杆菌门为瑶鸡肠道中的优势菌群,II、III、IV、V组厚壁菌门相对丰度均高于对照组I;在属水平上,II、IV组乳酸菌属相对丰度极显著提高（P＜0.01）;Alpha多样性分析显示,灌胃枯草芽孢杆菌提高了瑶鸡肠道微生物群落丰度和多样性,且III、IV、V组微生物群落丰度和多样性比II组更高;Beta多样性PCOA分析表明,I、II、III、IV、V组组间微生物多样性（群落组成及结构）差异极显著（P=0.001）。结果表明,瑶鸡源枯草芽孢杆菌对瑶鸡免疫机能、肠道形态、消化酶活性、肠道微生物群落丰度和多样性的作用优于牛源芽孢杆菌,佐证了同源菌株相较异源菌株具有更好的益生特性;不同浓度瑶鸡源芽孢杆菌的益生效果存在差别,本试验显示灌胃2.0×108 CFU/m L浓度组体内益生效果相对较好,提示后续研究需关注益生菌的作用效果与投喂剂量之间的关系。综上所述,本试验成功分离到一株性能优良的鸡源枯草芽孢杆菌,其对瑶鸡具有较好的益生作用。