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目的： 为有效切割肿瘤细胞端粒酶RNA组分及逆转录酶组分mRNA，抑制肿瘤细胞端粒酶活性，从而达到肿瘤基因治疗的目的。开展该系列研究： 方法与结果： 1．针对端粒酶RNA组分模板区设计合成锤头状端粒酶核酶（teloRZ），构建了teloRZ基因体外转录质粒pSPT19-teloRZ和真核表达质粒pXJ-neo-teloRZ，用T7/SP6体外转录系统检测了teloRZ对端粒酶RNA组分的体外切割效率，达60％左右。用脂质体介导法，将pXJ-neo-teloRZ导入HeLa细胞和裸鼠移植瘤，结果使HeLa细胞端粒酶活性降至对照细胞的11％～12.5％，细胞生长速度明显变慢，传至19～20代时出现95％凋亡，裸鼠移植瘤注射pXJ-neo-teloRZ14d后，端粒酶活性下降69％，抑瘤率达62％。 2．设计并合成了针对端粒酶逆转录酶mRNA-2239的锤头状核酶基因，构建了该核酶基因的体外转录和真核表达质粒。检测了该核酶对端粒酶逆转录酶mRNA的体外切割效力。并将该核酶基因转染至肿瘤细胞中，检测其对肿瘤细胞端粒酶活性和生物学性状的影响。结果表明，该核酶在体外和细胞内均能有效切割端粒酶逆转录酶mRNA;在细胞内能明显抑制端粒酶活性，使其降至对照细胞的50%一25%。并使细胞生长变慢，倍增时间延长。3.设计合成了针对端粒酶逆转录酶mRNAS’端区的锤头状核酶hTERT一5’Rz基因，并将该基因重组入peDNA3.1（+），经体外转录得到小片段hTERT一5，RZ。用脂质体介导法，将hTERT一5，RZ导入Hela细胞以检测其对Hela细胞端粒酶活性的抑制效力。同时比较了同法合成的针对端粒酶RNA模板的核酶（t el0RZ）和二种核酶混合物对Hela细胞端粒酶活性的抑制效力。结果，小片段hTERT一5，双能有效抑制Hela细胞端粒酶活性，且其抑制效力较单纯teloRZ为高，二种核酶混合物的端粒酶抑制效力与hTERT一5’RZ相当，也高于单纯tel0RZ。提示，小片段核酶hTERT。5’RZ可望成为优于teloRZ的端粒酶抑制剂，在肿瘤基因治疗中发挥作用。4.为探讨肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成与端粒酶表达的生物节律。在时辰同步化裸鼠中构建肝癌细胞SMMC一7721裸鼠移植瘤，继续在程控光照条件下饲养，于光照后3，6，9，12，巧，18，21小时取样，用流式细胞仪测定各时期细胞DNA含量，细胞周期分布及端粒酶活性水平。结果，肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成随昼夜节律变化，且伴随端粒酶活性的同步节律变化，节律周期呈余弦分布。表明，肝癌裸鼠移植瘤的生长与端粒酶活性表达在静止相达高峰，为制定肿瘤时辰化疗方案提供了有价值的参考。5.用hTERT一5’RZ核酶对肝癌裸鼠移植瘤施以时辰治疗。比较在光照后9小时（9 HALO）用药和光照后21小时（21 IIALO）用药的疗效。结果，21HALO组抑瘤率为63%，gHALO组抑瘤率为50%。表明，hTERT一5’核酶择时用药，能更好地抑制肿瘤生长。结论: 我们设计合成的端粒酶核酶Telo一RZ及hTERT一5’Rz均可望成为有效的端粒酶抑制剂，在肿瘤基因治疗中发挥作用。肿瘤细胞端粒酶活性存在近日节律表达，因而端粒酶抑制剂择时用药能有效提高肿瘤治疗疗效。