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本研究的目的在于建立和优化新铁炮百合植株再生受体系统,以进行遗传转化。
从新铁炮百合鳞片、茎轴诱导产生大量愈伤组织。利用UL9(34)均匀正交设计分析比较了2,4-D、NAA、BA三种生长调节剂对百合愈伤组织诱导的影响,确定愈伤组织诱导的最优培养基为MS+2,4-D0.1mg/L+NAA1mg/L+BA0.1mg/L。在愈伤组织诱导和增殖过程中观察到各种类型的愈伤组织,初步分为5种类型,其中Ⅰ型为再生能力较强的胚性愈伤组织。通过对26个培养基配方进行系统的研究,筛选出可诱导愈伤组织形态由非胚性愈伤组织(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)向胚性愈伤组织(Ⅰ型)转变的CPM9(MS+NAA0.5mg/L)培养基。首次在新铁炮百合愈伤组织培养过程中,观察到了体细胞胚胎发生过程,胚性愈伤组织在无生长调节剂的培养基上可再生大量的植株。
将新铁炮百合未转化的愈伤组织和幼苗接种到含不同浓度抗生素的培养基上。结果表明,两种抑菌性抗生素头孢霉素和羧苄青霉素对新铁炮百合愈伤组织生长没有影响,新铁炮百合愈伤组织和幼苗对潮霉素非常敏感,而对卡那霉素的敏感性较差。以新铁炮百合胚性愈伤组织为受体,初步建立了农杆菌介导的新铁炮百合遗传转化系统,获得了抗潮霉素的愈伤组织。