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2型糖尿病(2-DM)是一种常见的严重危害人类健康的慢性终身性疾病。近年研究发现，2型糖尿病患者红细胞(RBC)免疫功能低下，且与病程及并发症的发生、发展相关。然而对2型糖尿病引起红细胞免疫功能下降的原因，是继发性因素还是原发性因素或二者共同作用所致，一直存有争议。第一补体受体(CR1)是红细胞膜上主要的免疫相关物质，其数量由常染色体共显性遗传决定，通过红细胞CR1密度相关基因来表达。目前国外对1型糖尿病与红细胞CR1密度相关基因多态性的关系作过一些研究，然而对2型糖尿病患者红细胞CR1密度相关基因多态性的研究，国内外尚无人涉及。本研究采用PCR和Hind Ⅲ内切酶酶切技术及红细胞免疫粘附花环试验，对2型郑州人，Z20贴年叭究生论义2型糖尿病红细胞免疫功能及＊ 基因多态性糖尿炳患者进行1＊病例－对照研究，以观察2型糖尿病患者红细胞免疫功能及红细胞CRI密度相关基因型的频率分布，并探讨可能的发病机制。 检测对象及血样的采集 2型糖尿病患者组56例，男26仔，女30例，年龄52．84士 5．43岁；对照组 56例，男 26例，女 30例，年龄53．39 5．22岁。两组性别、年龄无显著性差异（P＞0．05） 清晨空腹采集检测对象全血 Zml，lmIEDTA七。抗凝，－20OC保存备抽提 DNA；lml肝素抗凝，4h内完成红细胞免疫功自试验。 实验方洁 1．红细胞CRI密度相关基因多态性的测定： 山提取DNA：取冻存的EDTA抗凝血，室温下融解，加灭菌双蒸水洗涤破坏红细胞，5000rpm离心smin，弃上清，重复操作一次，收集白细胞，常规提取DNA； （2）扩增：总反应休系30山，PCR反应试剂及其量如下：弓物 1＊卜mol／L、dNTPs 200 pmollL、模板DNA 3 卜扩增缓冲液若干，最后用石蜡油加…封闭。置入FR习00PcR循环扩增仪中，94 oC预变性 240秒，94 C变性 60秒，55 C退火 50秒，72 C延伸 50秒，循环 30次，最后 72 OC延伸 300秒； 一2 一郑州人学2002年川叽生论义2型糖尿病红驯胞免疫功能及Cm基闪多态。叮 （3）取扩增产物 5 pl，澳乙锭汇B）染色，1％琼脂糖凝胶板上点样，电泳，紫外灯下观察扩增是否成功； m酶切：取扩增产物 14 pl，加入缓冲液 2 pl，牛血清白蛋白（BSA）0．2 pl，Hind Ill酶 lpl 禾灭菌双蒸水 28pl，放入37＊恒温箱 1．sh 乃）结果判断：取 10 UI酶切反应液和 Marker 5 pl，在 1％琼脂糖凝胶点样，EB染色电泳，紫外箱观察结果。扩增产物只有1．8 kb一条带者为高表达卜H）型；有 1．8 kb、1．3 kb禾 0．5 kb三条带者为中表达卜L）型；有 1．3 kb和 0．5 kb两条带者为低表达（L）型。 2．红细胞兔疫粘附花环试验： n取肝素抗凝血，用生理盐水洗涤，离心弃上清，再加入生理盐水，调整红细胞数为 1．25x’个lml； （2）取致敏酵母菌诽致敏酵母菌冻干粉各一支，加少量生理盐水，于 37 C水浴中溶解，洗涤，离心弃上清，分别加牛理盐水调整酵母菌浓度为 1刀X10’个加l； 间取2支试管加入待测红细胞悬液各50 p；，试管1加入致敏酵母悬液50 pl，试管2加入非致敏酵母菌悬液50 pl，充分混匀，放入37℃水浴30min，取出后在每个试管里加入4滴生理盐水和 1滴0．25％戊二醛后摇匀，用吸管取半量在玻片上涂成薄膜，加甲醇固定后瑞氏染色； 3 一郑州人学m02年研究生论义2型糖尿病红细胞免疫功能及Cm基因多态性 （4）花环计数，在高倍镜下计数200个红细胞，1个红细胞粘附2个或2个以上酵母菌者为1个花环，管1计数红细胞C3b受体花环，管2计数红细胞免疫复合物花环。 （5）计算红细胞花环率 红细胞花环率＝孜妊缀 XI 00％ 200 结 果 1．两组人群的红细胞CRI基因型构成比及基因突变率的比较： 2型糖尿病组的HH型为57 14％、HL型为3750％，LL型为5．36％；对照组的HH型为67．86％、HL型为28．53％，LL型为 3．57o。两组比较，基因型构成比无显著性差异（尸＞口＊5）。 2型糖尿病组的基因突变率为42．86％＊4历6），对照组为32．14o门历6）。两组比较，也无显著性差异（P＞0．05）。 2．两组人群红细胞CRI基因型的红细胞C3b受体花环率（RBC－C3bR）比较： 2 型糖尿病组的 HH 型为 16，81 IS．790、HL 型为11．88士2．39％；对照组的 HH型为 26＊9士6．23％，HL型为21。34士6．64o。两组中HH型的RBC－C3bR均高于HL型（尸＜0刀1）。 一4 一郑州人学2002年研火生论文2型糖尿病红驯胞免疫功能及cm基1％多态性 3．两组人群红细胞CRI基因型的红细胞兔疫复合物花环率（RBC－CICR）比较： 2 型糖尿病组HH 型为7．47士2．04o，HL 型为10．60?