金黄色葡萄球菌压电免疫传感器检测方法研究

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金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,因此污染食品的机会很多,由于金黄色葡萄球菌而引起的食物中毒事件屡见不鲜,仅次于大肠杆菌,此外,当生长环境适宜时,金黄色葡萄球菌所产生的肠毒素也严重危害人类健康。而目前金黄色葡萄球菌检测的主要方法是国标中的平板计数法,其工作量大,操作繁琐,且周期较长,需要3-5天。面对食品安全所受到的挑战,亟需建立一种简单、快速、灵敏、检出限低的检测方法。本文建立了一种基于免疫反应,利用压电传感器快速且灵敏的检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。实验中,将抗金黄色葡萄球菌的鼠单克隆抗体修饰在石英晶振金电极表面作为生物敏感元件,并通过借助金标抗体达到对响应信号进行放大的目的,根据溶液中金黄色葡萄球菌含量的不同而引起的仪器响应值的变化,便可以实现对金黄色葡萄球菌的检测。实验结果表明,在适宜条件下,选取pH 5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液作为偶联缓冲溶液将鼠单抗浓度稀释至0.30 μg/μL修饰在石英晶振金电极表面;采用粒径为30 nm的胶体金颗粒,最适pH为8.5,最适抗体固定量为1 mL胶体金溶液固定42μg的兔抗,以此制得的金标抗体作为仪器响应信号放大的材料;以磷酸盐吐温缓冲溶液(PBST)作为背景溶液,以60μL/min作为进样速度,对不同浓度的金黄色葡萄球菌进行检测,在菌体浓度为2.1 × 102-2.1 × 105 CFU/mL时,菌体浓度与仪器的响应值(ΔF,Hz)呈良好的线性相关,检出限为22 CFU/mL,对于单个样品的检测20 min即可完成。在特异性实验中,该电极对金黄色葡萄球菌表现出很高的特异性,对大肠杆菌0157:H7、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、志贺氏菌几乎无交叉反应。为了验证该方法的实用性,对牛奶、猪肉、鸡肉、饺子进行了检测,并用传统的国标法进行了验证与对比,相关系数为0.9234,说明所建立的方法具有良好的准确性与实用性。本文所建立的检测方法操作简单,灵敏快捷,检出限低,可适用于大批量实际样品的快速检测。
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