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前言 胆囊癌是胆道系统中常见的恶性肿瘤，约占肝外胆道癌的25％，其确诊率低、预后差、术后生存率低。有研究表明，术后5年生存率仅为6.6％，如不能行根治性切除，术后的中位生存时间仅为3.2个月，根治性手术切除率仅为35.5％。目前认为胆囊癌的发生、发展与细胞凋亡有关，其发生可能由细胞增殖与死亡速率平衡失调引起。但对胆囊癌发生、发展的具体分子生物学机制尚不十分清楚。 Caspase-3是ICE家族重要成员是凋亡的执行者，BcL-2是虚泡性B细胞淋巴瘤的癌基因。其蛋白产物[BcL-2]可通过阻断细胞色素C的释放抑制Caspase-3活性从而抑制凋亡。有研究表明在胃癌、膀胱癌、卵巢癌、乳癌等多种肿瘤中，Caspase-3、BcL-2均存在异常表达，且二者关系密切，但在胆囊癌中尚无对二者进行研究。 本研究应用免疫组化方法，检测胆囊癌、胆囊腺瘤、慢性胆囊炎中Caspase-3、BcL-2的表达，结合临床资料探讨Caspase-3、BcL-2的表达异常与胆囊癌发生、发展的关系。 实验材料和方法 收集中国医科大学1992—2001年胆囊癌存档蜡块标本41例，胆囊腺瘤标本13例，慢性胆囊炎标本9例。胆囊癌组中，男性18例，女性23例，男女之比=1：1.14。病人年龄34—73岁，平均年龄58岁。其中，高分化腺癌15例，中分化腺癌14例，低分化腺癌12例(包括未分化癌)，鳞癌1例(高分化)，腺鳞癌1例(高分化人胆囊肉瘤1例（低分化人小细胞癌1例（低分化人 采用链霉亲生物素一过氧化物酶免疫组织化学技术KP法人标本均为10％福尔马林固定，石蜡包埋。切片厚度4Pm。以已知阳性淋巴结（BcL－2人扁桃腺（Caspase－3）组织切片为阳性对照。以PBS液代替一抗作为阴性对照。阳性着色为棕黄、棕褐及浅黄色，主要位于细胞浆，对照阳性切片，计数浆染色阳性的细胞，随机计数m个高倍视野，计数互见O个细胞，计算阳性细胞百分率，＞ 10％为阳性表达（＋X＜10％为阴性表达（一人应用SPSS软件进行统计学处理，两组间阳性率比较用X‘检验。 结 果 9例慢性胆囊炎中，Caspase－3表达均阳性，BcL－2表达均阴性。13例胆囊腺瘤中，Caspase－3在cL－2表达均阳性。在41例胆囊癌中CasPase－3阳性19例，阳性率低于胆囊良性病变差异有显著性；在41例胆囊癌中BCL－2阳性14例，显著高于慢性胆囊炎而与胆囊腺瘤相比显著降低。 41例胆囊癌中，Caspase－3表达阳性19例，阴性ZI例，阳性率为 46．3％。其中高分化组 Caspase－3的表达明显高于中、低分化组 P＜0．05。胆囊癌 Nevin分期 1＋11十皿 Caspase－3的阳性率为78．6呢，明显高N＋V期 Caspase－3的阳性率29．7阮。P＜0．of。无淋巴结转移组Caspase－3阳性率为75％，明显高于有淋巴结转移组阳性率28阮。P＜o．01。Casppsp－3的表达与病人的年龄、性别无显著关系。 41例胆囊癌中，BCL－2蛋白表达阳性14例，阴性27例，阳性率为 34．1％。其中高分化组 BCL－2蛋白的表达明显高于中、低分化组P＜o．皿1。胆囊癌Nevin分期1＋H十皿BcL一二蛋白的阳性率为 64．3％，显著高于 W＋V期 BcL－2蛋白的阳性率 18％ ·2·P＜0．001。无淋巴结转移组 BCL－2蛋白的阳性率为 68．8％，显著高于有淋巴结转移组阳性率 12％P＜0 01。BCL－2蛋白的表达与病人的年龄、性别无显著关系。 胆囊癌中14例BcL－2阳性的病例中Caspase－3阳性13例92．9呢；27例 BcL－2阴性的病例中 Caspase－3阴性 22例幻．5啪。二者有很好相关性P＜0．00，且二者表达有共位性即Caspase－3表达强的区域，BcL－2表达也强。 讨 论 BCL－2是一种抑制细胞凋亡的基因，其编码的［BCL－2 j蛋白过度表达可抑制细胞调亡，促进肿瘤发生。本研究发现在高分化胆囊癌中 BCL－2蛋白表达明显高于中、低分化胆囊癌（P＜0．01人在胆囊癌早期（I＋11十皿）中的表达明显高于在晚期 ＊V）中的表达（P＜0．co门，在无淋巴结转移组中BCL－2蛋白表达明显高于有淋巴结转移组口＜0 of人在胆囊腺瘤及胆囊癌中 BCL－2蛋白表达显著高于慢性胆囊炎（P＜0．05人 目前认为胆囊腺瘤是一种癌前病变，可以看出，BCL－2抑制凋亡的作用对于胆囊癌的发生有极大作用，是胆囊癌的早期分子事件，同文献报导相符。BCL－2蛋白在早期（Ill Ill）和高分化胆囊癌中的表达明显高于晚期（wV）和中低分化胆囊癌，K8．8啪J2％＊＜o．001人说明BcL－2蛋白异常表达与胆囊癌的生物学行为密切相关。遗憾的是本实验未涉及胆囊癌预后问题，其异常表达与胆囊癌预后的关系有待进一步研究。 Caspase－3是ICE家族重要成员，目前公认：在多种刺激引起的凋亡中Caspase－3是关键的效应分子，目前对于Caspase－3在肿瘤组织中表达的意义及其与其他凋亡基因在肿瘤发生、发展中的相互关系研究很少。 ·3· 本研究结果显示，在胆囊良性病变中（慢性胆囊炎、胆?