大青叶化学成分及含量测定研究

来源 :江西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heyjoey
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本论文包括大青叶化学成分研究及其含量测定研究两部分。大青叶为十字花科菘蓝属植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥叶。该药材现收载于2020年版《中国药典》一部。其具有清热解毒,凉血消斑之功效。用于温病高热,神昏,发斑发疹,痄腮,喉痹,丹毒,痈肿。药理研究证明其具有抗菌、抗内毒素、抗炎、抗癌等药理活性。本论文对大青叶的化学成分进行研究,取大青叶药材18 Kg,经75%乙醇加热回流提取,利用硅胶色谱柱、RP-C18柱、葡聚糖凝胶柱层析等手段对大青叶提取物进行分离纯化,通过化合物的理化性质及NMR、MS等波谱技术进行结构鉴定,结果从大青叶中分离得到22个化合物,分别为:吲哚-3-乙腈(1)、色胺酮(2)、Rutalexin(3)、异牡荆素(4)、异金雀花素(5)、异牡荆素-3″-O-吡喃葡萄糖苷(6)、l iguadenosine B(7)、尿蓝母(8)、松柏苷(9)、紫丁香苷(10)、芹菜素7-O-β-葡萄糖苷(11)、木犀草素7-O-β-葡萄糖苷-3’-甲基醚(12)、1,2,2′-tri-O-E-si napoyl-β-gentiobiose(13)、1,2,6′-tri-O-E-sinapoylgentiobiose(14)、落叶松树脂醇-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)、落叶松树脂醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)、o-aminobenzoic acid-7-O-β-D-glucopyranosyl ester(17)、吲哚-3-乙腈-6-O-β-D-葡糖苷(18)、腺苷(19)、芦丁(20)、金圣草素6-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-吡喃葡萄糖苷(21)、胭木二酮(22)。其中,化合物1、3、7~9、11~18、21、22均为首次从大青叶中分离得到。本课题组采用高效液相色谱法首次同时测定大青叶中1,2,2′-tri-O-E-sinapoyl-β-gentiobiose和1,2,6′-tri-O-E-sinapoylgentiobiose等2个化合物的含量。色谱条件:采用依利特C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0~25 min,23%A;25~55 min,24%A);流速1.0 m L·min-1,检测波长328 nm,柱温30℃。结果:2个化合物进样量分别在0.0202~1.0100μg(R~2=0.9998)和0.0281~1.4050μg(R~2=0.9999)范围内与峰面积显现出良好的线性关系;精密度、稳定性和重复性的RSD均小于2%;平均回收率(n=6)分别为99.05%(RSD=0.34%)和99.60%(RSD=0.65%)。9批样品中2个化学成分含量范围分别为0.3007~3.0863和0.1135~2.6766 mg.g-1。采用高效液相色谱法首次同时测定大青叶中异牡荆素、异牡荆素-3″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素、金圣草素6-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-吡喃葡萄糖苷等4个成分的含量。色谱条件:采用ACE Excel 5 C18-AR(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水(13.5:86.5)为流动相,等度洗脱,流速1.0 m L·mi n-1,检测波长269 nm,柱温30℃。结果:异牡荆素、异牡荆素-3″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素、金圣草素6-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-吡喃葡萄糖苷等4个化合物进样量分别在0.0438~1.0950μg(R~2=1.0000)、0.0414~1.0350μg(R~2=1.0000)、0.0288~0.7200μg(R~2=1.0000)和0.0520~1.300μg(R~2=1.0000)范围内与峰面积显现出良好的线性关系;精密度、稳定性和重复性的RSD均小于2%;平均回收率(n=6)分别为98.12%(RSD=1.25%)、97.01%(RSD=0.71%)、100.28%(RSD=1.23%)和98.51%(RSD=1.07%)。9批样品中4个化学成分含量范围分别为1.0053~2.0666、0.1338~1.8760、0.5449~1.5192和0.1669~2.5872 mg.g-1。
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