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[目 的]分析慢病毒介导反义CK13基因对裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤放疗前后细胞周期及凋亡的影响,论证反义CK13基因在鼻咽癌治疗中有降敏作用,为CK13基因在鼻咽癌治疗中的作用提供实验基础。[方 法]本实验先培养细胞,再进行动物实验。动物实验分成O、H两组来进行。1、含目的基因NPC动物模型O组(A1:HNE1细胞;B1:转染空载体HNE1细胞;C1:转染anti-CK13a的HNE1细胞;D1:转染anti-CK13b的HNE1细胞)。2、NPC动物模型局部注射质粒H组(A2:对照组,注射生理盐水;B2:空质粒组,注射空慢病毒质粒;C2:反义CK13a组,注射反义CK13a慢病毒质粒;D2:反义CK13b组,注射反义CK13b慢病毒质粒)。3、放疗,并测量放疗前后肿瘤体积。4、处死小鼠,并取荷瘤小鼠肿瘤组织予以HE、Western blot、PCR和Tunel等检测。5、结果进行统计学分析。[结 果]1、实验期间所有裸鼠无死亡情况,存活率为100%;种瘤后腋下均形成明显肉眼可见的移植瘤,成瘤率为100%。两组移植瘤病检显示均呈现低分化鳞癌。2、通过计算瘤体体积,我们发现实验组(C1、D1、C2、D2)肿瘤生长体积较对照组(A1、A2)、空载体组(B1、B2)明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、检测细胞周期发现,A1、A2组和B1、B2组均无G1期阻滞,出现短暂S期阻滞,有明显的G2/M期阻滞;而C1、C2组和D1、D2组与A1、A2和B1、B2两组相比,S期阻滞没有显著变化,但G2/M期阻滞峰值明显增强,阻滞时间延长,有极显著的统计学意义(P<0.05)。4、Tnuel检测结果显示,A1、B1组的癌组织凋亡率分别为46.52±5.55%和45.30±9.10%,两组相比无显著性差异(P>0.05);而C1组和D1组的癌组织中凋亡率分别为19.48±2.89%和26.08±11.67%,两组相比无显著性差异(P>0.05)。C1、D1组与A1、B1组比较癌组织凋亡率明显下降(P<0.05)。在H组中,我们发现了同样的趋势。5、Westernblotting检测结果显示,放射后A1、A2组和B1、B2组中caspase-3和PARP二者的剪切体表达水平明显升高,而反义CK13处理组(C1、C2组和D1、D2组)剪切体的水平较对照组(A1、A2组和B1、B2组)的表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。6、RT-qPCR检测细胞周期信号通路相关因子mRNA水平的变化,结果显示CK13可能与ATM和Chk2的下游信号因子通路密切相关,并且能够调控Cdc25c进行让鼻咽癌在辐射条件下阻滞于G2/M期。[结论]反义CK13基因能够显著降低鼻咽癌HNE1细胞株的放射敏感性,其作用机制可能通过延长细胞周期及减少细胞凋亡来降低鼻咽癌HNE1细胞的放射敏感性,间接证明CK13基因能够提高鼻咽癌HNE1细胞的放射敏感性;同时我们还发现CK13基因可通过调控Cdc25c信号通路使鼻咽癌在辐射条件下阻滞于G2/M期,为CK13基因成为NPC治疗的靶向基因提供实验依据。