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实验目的
瘢痕是人体创伤愈合过程的必然产物,是进行组织修复的一种机制。病理性瘢痕是以胶原等大量结缔组织的基质过度沉积为特征的皮肤纤维化疾病,包括增生性瘢痕及瘢痕疙瘩。主要表现为明显的瘤样增生和功能障碍。近年来,随着细胞生物学和分子生物学在瘢痕形成机理方面研究的深入,人们逐渐发现细胞因子在病理性瘢痕的形成中起重要作用,其中,转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)的作用较为肯定。我们通过研究TGF-β3在病理性瘢痕中的表达情况,探讨TGF-β3在病理性瘢痕形成中所发挥的作用,为临床治疗及预防病理性瘢痕的发生提供理论依据。
实验方法
收集中国医科大学第一附属医院2009年-2011年经手术切除后弃用的病理性瘢痕55例,作为实验组,根据临床表现及病理性质将其进行分组,其中包括瘢痕疙瘩A组15例,增生性瘢痕增值活跃期期B组20例,增生性瘢痕成熟稳定期C组20例。选取浅表性瘢痕25例及正常皮肤8例作为对照组,分别设为D组、E组。在室温下,标本进行石蜡包埋制作蜡块,切片厚度为3μm。每例切4张,一张做HE染色,两张做免疫组织化学染色,一张用于阴性对照。常规脱蜡至水,以3%双氧水消除内源性过氧化酶氧化物酶活性,高压修复1.5min,山羊血清阻断非特异性抗原孵育10min后,每例标本分别加入TGF-β3一抗工作液,4℃湿盒过夜,滴加生物素化二抗工作液,滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液,其间分别用PBS冲洗3min*3次/min。DAB显色,复染、脱水、透明,封片。以PBS代替一抗进行阴性对照。显微镜下观察,照相。根据阳性细胞表达率及阳性细胞着色程度的差异,采用SPSS17.0统计软件进行非参数Mann-WhitenyUtest统计学分析,p<0.05,具有统计学意义。
实验结果
病理性瘢痕及浅表性瘢痕组织中TGF-β13蛋白阳性表达的细胞胞浆着棕黄色,主要包括上皮基底层细胞和成纤维细胞,血管内皮细胞内也有微弱的阳性染色。免疫组化结果表明:实验组的阳性率分别为A组40.00%;B组45.00%;C组70.00%;对照组D组88.00%;E组0.00。实验组中,A、B两组比较,差异无统计学意义(p>0.05);B、C两组比较,差异具有统计学意义(p<0.05)。实验组A、B、C组分别与对照组D组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)即TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于正常瘢痕组织,而正常皮肤组织中TGF-β3呈弱阳性或阴性表达。
实验结论
1.TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于浅表性瘢痕组织。
2.TGF-β3在瘢痕疙瘩及增生性瘢痕不同时期的表达量不同,所起到的作用不同。
3.TGF-β3表达水平的降低可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一。