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[目的]分析Grb2shRNA转染对肠癌细胞HT29信号通路的影响，探讨针对Grb2的抑制应用于肠癌治疗的可行性。[方法]应用shRNA慢病毒质粒系统，将Grb2shRNA转染至293T细胞，获得Grb2shRNA慢病毒颗粒，并感染肠癌HT29细胞。MTT法检测细胞生长抑制情况，利用RT-PCR检测Grb2mRNA表达，Western Blot检测Grb2、P42/44ERK、磷酸化P42/44ERK、Akt、磷酸化Akt（P-Akt）和STAT5等信号通路分子表达的改变。[结果] Grb2shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞后，获得5株感染shRNA慢病毒颗粒的肠癌HT29细胞株为实验组（即感染Grb2shRNA的细胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、 HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73），以eGFP shRNA慢病毒感染肠癌HT29细胞为阴性对照组。感染72小时后，经RT-PCR、Western Blot检测后，发现HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞中Grb2的抑制效果最好。与空白对照、阴性对照比较，HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73细胞在感染后24小时OD值分别为0.176±0.045，0.186±0.013（P<0.001）,48小时为0.347±0.048、0.382±0.041(P<0.001),72小时为0.934±0.038、0.983±0.205（P<0.01）；Phospho-p42/44ERK、Akt、Phospho-Akt明显下降，而ERK、STAT5表达不受影响。[结论]应用慢病毒载体系统转染Grb2shRNA至HT29细胞，导致Grb2在mRNA和蛋白水平上明显抑制，并影响HT29细胞生长和相关信号转导通路分子表达下调。