【摘 要】
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目的:为探究肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）患者样本中miR-630的表达情况,在细胞学水平研究肾透明细胞癌中miR-630是否靶向结合YES1并通过PI3K/AKT信号轴通路促进CCRCC的进展,为临床肾透明细胞癌的诊断,治疗,预后提供精准可靠的理论依据。方法:1.生物信息学技术预测miR-630互作蛋白,q RT-PCR和Western
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目的:为探究肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）患者样本中miR-630的表达情况,在细胞学水平研究肾透明细胞癌中miR-630是否靶向结合YES1并通过PI3K/AKT信号轴通路促进CCRCC的进展,为临床肾透明细胞癌的诊断,治疗,预后提供精准可靠的理论依据。方法:1.生物信息学技术预测miR-630互作蛋白,q RT-PCR和Western blot检测沉默miR-630后的YES1的表达,双荧光素酶检测两者的联系,并利用Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT的关键分子的表达;2.收集2019年6月至2021年8月在XX大学附属医院未接受任何辅助治疗的肾癌患者,行根治性肾癌切除术后立即留取肿瘤内部非坏死的组织作为实验组,并留取距肿瘤肉眼边缘1.5cm以外的外观正常的肾实质组织作为对照组;3.应用实时荧光定量法（q RT-PCR）检测肾癌组织及癌旁组织miR-630的水平,并完整记录临床病理参数;4.QRT-PCR检测miR-630在CCRCC细胞系中的表达;5.构建miR-630 inhibitor序列,并在肾透明细胞癌786-0细胞中进行转染并利用q RT-PCR检测表达;转染后利用CCK8、克隆实验和EDU实验检测增殖实验,Transwell和划痕实验检测转移能力,FITC/PI双染法和PI单染分别检测各组凋亡和细胞周期变化;6.应用SPSS26.0、Graph Pad Prism 8软件进行分析。结果:1.q RT-PCR技术检测结果,miR-630在CCRCC癌组织中呈高表达状态,而癌旁组织中miR-630表达情况明显低于癌组织,通过配对t检验分析发现miR-630的表达差异具有统计学意义（P＜0.05）;2.在CCRCC癌组织中miR-630表达与年龄、性别无关;miR-630表达趋势与TNM分期、核组织学分级、肿瘤淋巴结转移方面,差异具有统计学意义（P＜0.05）;3.miR-630在786-0细胞系中过表达;4.下调miR-630可抑制786-0细胞的增殖（P＜0.05）,且使细胞周期停滞在G1期细胞比例增多;5.下调miR-630可抑制786-0细胞的转移,并增多了早期凋亡情况（P＜0.05）;6.沉默miR-630后,YES1的m RNA和蛋白水平均下降,且miR-630与YES1直接结合;7.沉默miR-630和沉默YES1后影响了p-AKT和p-PI3K的表达。结论:1.在CCRCC癌组织中miR-630表达情况明显高于癌旁组织,且其表达情况与TNM分期、核组织学分级、肿瘤淋巴结转移方面存在正相关性,差异具有统计学意义（P＜0.05）,提示miR-630在肾透明细胞癌恶性进展过程中起一定作用;2.MiR-630促进了786-0细胞的增殖、转移能力,使细胞周期停滞于G1期,并促进了786-0细胞的凋亡逃逸;且在沉默miR-630和YES1后影响了p-AKT和p-PI3K的表达,表明miR-630/YES1/PI3K/AKT轴促进了CCRCC的进展。
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