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目的:自人小梁网分离培养多潜能干细胞,探索其分化为角膜内皮细胞的可行性。 方法:采用胶原酶 A(collagenase A)消化法从人小梁网组织中分离细胞(human trabecular meshwork multipotent stem cells,TM multipotent stem cells),采用改良的胚胎干细胞培养液(modified embryonic stem cell medium, MESCM),在包被Matrigel的塑料培养板上,连续传代扩增培养。以人角膜基质细胞(human corneal fibroblast cells, HCF)为对照,采用实时定量PCR技术和免疫荧光技术,检测小梁细胞、胚胎干细胞及神经嵴细胞标志物的表达。采用分化培养基诱导对第2-3代细胞向脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞诱导分化,角膜内皮细胞诱导培养液(低糖DMEM、10%FBS、50μg/mL庆大霉素和1.25μg/mL两性霉素B)诱导细胞分化,免疫荧光染色检测诱导产生的多角形细胞表达人角膜内皮细胞(human corneal endothelial cells,HCEC)标志物的情况。 结果:实时定量PCR和免疫荧光结果显示:采用本方法从小梁组织中分离得到的细胞表达TM内皮细胞标志物(AQP-1、CHI3L1和 MGP),细胞为纺锤形,可以连续传代4代,细胞数量倍增13次。这群细胞表达胚胎干细胞标记物(Oct4、Sox2和Nanog)及神经嵴细胞标志物(p75NTR、FOXD3和Sox9),可分化为脂肪细胞和软骨细胞,而不能分化为骨细胞。在角膜内皮细胞诱导培养液(低糖DMEM、10%FBS、50μg/mL庆大霉素和1.25μg/mL两性霉素B)诱导下分化为多角形的细胞,表达角膜内皮细胞特异性标志物(γ-tubulin、p120、N-cadherin、α-catenin、β-catenin、Zonaoccludens protein1(ZO-1)和Na-K-ATPase)。 结论:小梁网组织中可以分离培养一种多潜能干细胞,具有分化为脂肪细胞、软骨细胞及角膜内皮细胞的能力。