慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)是临床常见的慢性顽固型便秘,占便秘发病率的25%。其临床表现顽固,综合保守治疗效果不佳。由于临床滥用泻剂,导致便秘的进行性加重,最终导致药物失效只能实施手术治疗。由于该疾病的发病机制至今尚不明确,给临床防治带来极大困难。本研究使用分子生物学方法结合高通量测序分析慢传输型便秘及益生菌制剂缓解慢传输型便秘过程中粪便样品中的微生物群落结构,并对构建的慢传输型便秘小鼠生理指标进行分析,研究益生菌混合发酵酸奶对慢传输型便秘的治疗效果,以期为临床诊断及治疗提供理论依据。小鼠及便秘患者实验结果表明,自主配方三菌酸奶可明显缓解慢传输型便秘症状。通过对小鼠生理指标的检测,可以看出三菌酸奶组小鼠的小肠推进率、首次排黑便时间均优于其他组,且三菌酸奶可明显逆转小鼠的便秘症状。而通过小鼠粪便样品中短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)的检测可以看出三菌酸奶有明显的降低能量供应的作用。从OTU数目、ACE和Chaol指数来看,随着喂食酸奶天数的增加,小鼠粪便样品及慢传输型便秘患者粪便样品中的细菌多样性显著降低,而小鼠在喂食便秘药物洛哌丁胺后,两菌酸奶组小鼠OTU数目与健康对照组增加且无显著差别,而三菌酸奶组与便秘模型组降低。慢传输型便秘患者粪便样品中的细菌多样性显著降低,这说明便秘导致肠道中的有害微生物增加,而可能导致其他一些微生物的生长受到抑制甚至死亡,喂食益生菌混合发酵酸奶后,有益微生物在肠道内大量定植,抑制了有害微生物的生长,从而使粪便样品中细菌的多样性呈现下降的趋势。在小鼠实验中,比较不同组所有小鼠的细菌群落结构显示,在门的分类水平上,四个组的小鼠粪便样品中主要的细菌为Bacteroidetes、Firmicutes和Proteobacteria。饮用两菌酸奶组小鼠粪便样品中Firmicutes与Proteobacteria的量明显低于其他组,而Bacteroidetes所占序列比例更高。随着实验天数的增加,各组小鼠粪便样品中的微生物群落发生着明显的改变。对不同组别的小鼠按处理时间进行微生物群落分析可以看出,小鼠粪便样品中Candidatusfamily ratAN060301C、Rikenellacae随着喂食小鼠酸奶天数的增加而增加,而Lachnospiraceae、Desulfovibrionaceae 与 Carnobacteriaceae 是减少的,其之所以在粪便样品中增加或减少是由于其在肠道内的定植发生改变。UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means)聚类和主成分分析(principal components analysis,PCA)都表明,不管何种方法,所得到的细菌群落聚类结果大致相同,喂食益生菌制剂前小鼠粪便样品中的细菌群落结构分布不均匀,无显著相关性,而喂食益生菌制剂后小鼠粪便样品中细菌群落结构较为相似,且三菌酸奶组比两菌酸奶组更为相似。比较所有便秘患者饮用益生菌混合发酵酸奶前后粪便样品中细菌群落结构,可以看出,在门的分类水平上,饮用益生菌混合发酵酸奶前粪便样品中的细菌多样性高于饮用后,而其中有近一半的序列属于Bacteroidetes和Firmicutes,Proteobacteria和Actinobacteria序列所占比例较少。在属的分类水平上,饮用益生菌混合发酵酸奶前粪便样品中的细菌多样性高于饮用后,但两个样品中优势属所占的序列百分比并无明显差异,均为Bacreroides和Faecalibacterium。通过对每个患者饮用益生菌混合发酵酸奶前后粪便样品中细菌的主要属进行的分析和比对可以看出,绝大多数患者饮用益生菌混合发酵酸奶前后粪便样品中的优势菌均为 Bacteroides,大多数是 Faecalibacterium。研究慢传输型便秘患者饮用益生菌混合发酵酸奶前后粪便样品微生物群落结构组成和演替规律,结合小鼠便秘模型试验,寻找引起便秘及益生菌混合发酵酸奶缓解便秘过程中的关键微生物,为便秘的临床治疗提供有力的新的治疗手段。