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研究目的
研究活动性肺结核病患者外周血循环单核细胞、中性粒细胞和NK细胞噬菌能力,以及单核细胞mTOR信号通路活化情况及自噬水平。
研究方法
1.利用流式细胞术分析活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞、中性粒细胞、NK细胞在基础水平(0℃)、活化状态下(37℃)对E.coli的吞噬水平,评价结核分枝杆菌感染对单核细胞、中性粒细胞、NK细胞噬菌能力的影响。
2.利用流式细胞术分析活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞mTOR信号通路中Akt、p-Akt、Rheb、mTOR、Raptor和AMPK等分子的表达水平。
3.磁珠分选纯化活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞:
①RT-qPCR检测单核细胞ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1和ULK1等自噬基因mRNA水平。
②毛细管纳米免疫分析技术检测单核细胞中ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1、ULK1、p-ULK1S757和LC3-I/II等自噬相关蛋白表达水平。
研究结果
1.在基础状态下(0℃),活动性肺结核病患者外周血单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli细胞比例与健康志愿者相比明显增加(p<0.05)。但经37℃活化后,活动性肺结核病患者外周血单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli细胞比例增加程度明显低于健康对照组(p<0.05)。
2.以CD14+细胞圈门,结果显示:活动性肺结核病患者外周血CD14+Rheb+细胞和CD14+Raptor+mTOR+细胞比例明显高于健康志愿者(p<0.05);而CD14+AMPK+细胞比例、CD14+pAkt+细胞比例和CD14+Akt+细胞比例明显低于健康对照者(p<0.05)。
3.RT-qPCR结果显示:活动性肺结核病患者单核细胞中自噬基因ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1、和ULK1mRNA表达水平明显高于健康对照者(P<0.05)。
4.毛细管纳米免疫分析结果显示:活动性肺结核病患者单核细胞ULK1、p-ULK1Ser757和Beclin-1、ATG16L1、LC3-II蛋白表达均明显高于健康对照者;而ATG5和ATG5-ATG12蛋白复合体表达则明显低于健康对照者。
研究结论
活动性肺结核病患者外周血循环单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli能力降低,伴单核细胞mTOR信号及自噬活化。
研究活动性肺结核病患者外周血循环单核细胞、中性粒细胞和NK细胞噬菌能力,以及单核细胞mTOR信号通路活化情况及自噬水平。
研究方法
1.利用流式细胞术分析活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞、中性粒细胞、NK细胞在基础水平(0℃)、活化状态下(37℃)对E.coli的吞噬水平,评价结核分枝杆菌感染对单核细胞、中性粒细胞、NK细胞噬菌能力的影响。
2.利用流式细胞术分析活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞mTOR信号通路中Akt、p-Akt、Rheb、mTOR、Raptor和AMPK等分子的表达水平。
3.磁珠分选纯化活动性肺结核病患者和健康志愿者外周血单核细胞:
①RT-qPCR检测单核细胞ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1和ULK1等自噬基因mRNA水平。
②毛细管纳米免疫分析技术检测单核细胞中ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1、ULK1、p-ULK1S757和LC3-I/II等自噬相关蛋白表达水平。
研究结果
1.在基础状态下(0℃),活动性肺结核病患者外周血单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli细胞比例与健康志愿者相比明显增加(p<0.05)。但经37℃活化后,活动性肺结核病患者外周血单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli细胞比例增加程度明显低于健康对照组(p<0.05)。
2.以CD14+细胞圈门,结果显示:活动性肺结核病患者外周血CD14+Rheb+细胞和CD14+Raptor+mTOR+细胞比例明显高于健康志愿者(p<0.05);而CD14+AMPK+细胞比例、CD14+pAkt+细胞比例和CD14+Akt+细胞比例明显低于健康对照者(p<0.05)。
3.RT-qPCR结果显示:活动性肺结核病患者单核细胞中自噬基因ATG5、ATG12、ATG16L1、Beclin-1、和ULK1mRNA表达水平明显高于健康对照者(P<0.05)。
4.毛细管纳米免疫分析结果显示:活动性肺结核病患者单核细胞ULK1、p-ULK1Ser757和Beclin-1、ATG16L1、LC3-II蛋白表达均明显高于健康对照者;而ATG5和ATG5-ATG12蛋白复合体表达则明显低于健康对照者。
研究结论
活动性肺结核病患者外周血循环单核细胞、中性粒细胞和NK细胞吞噬E.coli能力降低,伴单核细胞mTOR信号及自噬活化。