目的 对于开放性创伤及皮肤缺损,临床上治疗的关键是尽早关闭创面,建立屏障。而大面积皮肤缺损患者,自身皮肤修复过程不足,必须采取其他方法来关闭创面,达到治愈的目的。组织工程人工皮肤为各种原因所致的皮肤缺损提供了新选择,在国外已有多种商品化产品出售并用于临床,国内也有数家单位正致力于该领域的研究开发。本实验旨在研究以壳多糖-胶原凝胶支架材料和口腔粘膜成纤维细胞(oral mucous fibroblasts,OMF)在体外构建人工固有层的配方、组织学特性、种子细胞存活情况,探讨以壳多糖-胶原凝胶支架材料和OMF在体外构建人工固有层的可行性,为复方壳多糖组织工程口腔粘膜的制备提供实验依据。 方法 取大鼠OMF进行体外培养,在无菌条件下将2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液、壳多糖等或2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液等按一定比例配置成凝胶溶液,然后将OMF与上述凝胶溶液迅速混合制成口腔粘膜人工固有层。每2天换液一次,动态观察细胞生长状况和凝胶收缩情况。于体外培养21天,作扫描电镜及透射电镜观察细胞形态学变化。另取壳多糖-胶原凝胶细胞基质和胶原凝胶细胞基质HE染色,组织学观察。 结果 成功建立大鼠OMF种子细胞库,原代细胞与传代细胞在形态和生长速度上无显著差异。壳多糖-胶原-OMF复合物(FPCCL)体外培养1天,OMF在支架材料中生长良好,细胞呈长梭形,排列无一定方向。随时间推