本硕士论文分为两章，分别是基于rhaSR的嵌合操纵子的构建以及表达菌株的构建。 第一章主要介绍了通过PCR等基因重组技术，以pALEX为原始载体，构建了含rhaSR操纵子表达调控元件、RhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子。通过引物设计，构建了含不同rhaSR操纵子表达调控元件及不同SD结合序列的RhaR基因的四种表达载体pALEX—PRO、pALEX—PR1、pALEX—PR2和pALEX—PR3；将pALEX—PRO、pALEX—PR1、pALEX—PR2和pALEX—PR3分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，在不同培养基条件下，即含鼠李糖与不含鼠李糖的培养基中进行表达，通过紫外分光光度计测定GST蛋白(谷胱甘肽—S—转移酶)的活性发现：各表达质粒在鼠李糖的诱导下表达的GST蛋白是非诱导条件下表达的GST蛋白的4-5倍；在不同的表达质粒之间，在鼠李糖诱导的条件下，RhaR蛋白前SD结合序列为AGGAGGA的pALEX—PR0、pALEX—PR1中GST蛋白表达量高于RhaR蛋白前SD结合序列为AGGGA(RhaR原始SD)的pALEX—PR2中GST蛋白表达量，且pALEX—PR1(RhaR蛋白前SD结合序列与起始密码子ATG间有5bp间隔)的GST蛋白表达量高于pALEX—PRO(RhaR蛋白前SD结合序列与起始密码子ATG间无间隔)的GST蛋白表达量；由于不同的SD序列能够影响到RhaR蛋白的表达量，结果显示GST蛋白的表达量也受到影响，说明GST的表达量受嵌合操纵子中RhaR蛋白的表达量的影响，即gst前的rhaSR表达调控元件受RhaR蛋白的调控，且为正调控;将插入不同的rhaSR表达调控元件的pALEX—PR0(含CRP234结合位点)与pALEX—PR3(含CRP1234结合位点)分别在含鼠李糖的LB培养基、含葡萄糖+鼠李糖的LB培养基及LB培养基中进行表达，发现两种表达质粒均在含鼠李糖的LB培养基的GST蛋白表达量最高，在LB培养基中的GST蛋白表达量最低，pALEX—PRO在含鼠李糖的LB培养基中GST蛋白表达量高于pALEX—PR3的，pALEX—PR0在葡萄糖+鼠李糖的LB中表达的GST蛋白明显低于在鼠李糖的LB培养基中，pALEX—PR3在葡萄糖+鼠李糖的LB中表达的GST蛋白与在鼠李糖的LB培养基中没有明显差别，说明葡萄糖对表达质粒pALEX—PR0的影响大于对表达质粒pALEX—PR3的，可能是由于CRP1结合位点的存在，减弱了葡萄糖对其它三个CRP结合位点的影响，但从整体看，pALEX—PR0表达质粒优于pALEX—PR3表达质粒。 第二章中研究了利用pK03质粒构建不含功能rhaSR及rhaBAD的菌株，用于表达第一章中构建好的表达质粒。要构建不含功能rhaSR及rhaBAD的菌株，首先要构建中间载体pK03-SR、pK03-BAD，然后将中间载体电转化入具有重组能力的菌株如MC1061，EMG2中，利用pK03质粒的温敏、抗生素及SacB特性，改变温度与培养基中的蔗糖含量，筛选出合适的克隆。