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背景：Wnt家族是调节不同发育过程如增殖、不对称分裂、图式发育和细胞命运决定的信号分子，在肌肉的发育过程中起着重要作用。Wnt5a是Wnt信号家族中的重要成员之一，但尚缺乏其调控肌细胞发育的研究。C2C12肌原细胞系是由C3H小鼠骨骼肌卫星细胞永生化而来的细胞株，常被用做骨骼肌细胞发育的研究对象。目的：下调Wnt5a在C2C12细胞系中的表达，探讨Wnt5a对C2C12细胞增殖、细胞周期及分化的调控作用。方法：1、依据Gene Bank中小鼠Wnt5a基因序列设计并合成三条siRNA的DNA模板的两条单链，分别命名为siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3，同时设计siRNA-无关序列作为阴性对照（Negative control，NC）序列。以脂质体法转染C2C12细胞，应用SYBR Green实时定量PCR技术检测siRNA转染后的C2C12细胞在mRNA水平的表达，筛选出RNAi效果最好的siRNA序列用于后续的实验。2、以脂质体法转染C2C12细胞，分为实验组（siRNA干扰组）和阴性对照组（NC组）。应用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力，应用流式细胞仪检测细胞周期。3、加入含2%马血清的分化液使细胞肌向分化，应用SYBR Green实时定量PCR检测细胞分化后生肌调节因子家族成员Myf5、myogenin和MRF4，以及Wnt5a表达水平。应用免疫细胞化学法检测C2C12细胞系肌向分化过程中Myosin的表达，并观察细胞的形态学改变。结果：1、和NC组及其它各干扰组相比，siRNA-1高效下调了C2C12细胞内Wnt5a的表达水平（96.78%）。2、siRNA-1干扰Wnt5a表达下调后，CCK-8结果显示C2C12细胞增殖无明显变化，无统计学差异（P>0.05）；流式细胞仪检测结果显示停留于各期的细胞数未明显增加，无统计学差异（P>0.05）。3、siRNA-1干扰Wnt5a表达下调后，在分化的D0天，Wnt5a的表达水平明显下调，有统计学差异（P<0.05）；在分化的D2天，Myf5、MRF4的表达水平明显下调，有统计学差异（P<0.05）。免疫细胞化学法显示Myosin表达在多核肌管细胞中，胞浆染色强阳性，在分化的各天，siRNA干扰组和NC组比较细胞的形态无明显的区别。结论：体外下调Wnt5a基因表达对C2C12细胞系的增殖和细胞周期无显著影响，而肌向诱导分化的C2C12细胞系中Myf5和MRF4等表达水平下调提示了Wnt5a可能对骨骼肌细胞分化具有调控作用。