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将已经测定的GPV株系ORF5部分基因序列与RPV株系的序列进行比较，根据ORF5起始区域的核苷酸序列合成上游引物，以RPV ORF5基因框架3’外侧核苷酸及编码氨基酸序列作为参考，设计3’简并引物，以GPV ORF5基因组RNA为模板，RT—PCR扩增GPV ORF5基因片段，用pGEM-T载体克隆扩增片段。对克隆基因片段进行序列分析结果表明，ORF5全长1326个核苷酸，可编码441个氨基酸、分子量为50kD左右的蛋白质。这是首次获得GPV株系ORF5基因完整序列。 与其他黄症病毒ORF5基因核苷酸序列进行比较的结果显示，GPV与RPV的同源性最高，同源性达68.1%；与马铃薯卷叶病毒（PLRV）和甜菜西方黄化病毒（BWYV）的同源性次之，分别为33.6%和39.8%，与PAV、SGV、GAV、MAV的同源性分别为30.2%、28.8%、28.5%和29%。根据核苷酸序列推测出ORF5基因编码的氨基酸序列，对GPV株系与本组其它病毒的氨基酸序列等进行比较，结果显示GPV与RPV的同源性最高，为72.4%，与PLRV、BWYV的同源性次之，分别为31.4%和40.5%，与PAV、SGV、GAV、MAV的同源性最低分别为、25.6%、22.6%、25.1%、26.5%。根据最新的植物病毒分类研究进展，RPV、PLRV和BWYV均属于黄症病毒科的Polerovirus属，根据ORF5基因的序列分析和基因序列同源性比较结果，初步推测分离自中国小麦黄矮病株上的GPV株系在分类上属于黄症病毒科的Polerovirus属。 对由GPV ORF5和RPV ORF5基因核苷酸序列推测出的氨基酸片段进行氨基酸组成、部分理化性质及计算机模拟的蛋白结构模块进行比较。结果显示尽管GPV ORF5与RPV ORF5存在同源性，但两者在氨基酸片段长度、氨基酸组成、部分理化性质及蛋白结构模块的组成和分布上有较大的差异。 大麦黄矮病毒GPV株系Ohs基因的克隆、表达载体构建及转基因研究 根据测定的基因序列，分别设计合成含有酶切位点的ORFS的5’端 （含Xbl和起始密码AUG）和3’端（含K列）引物，通过RTICR方法扩增Ogys基因片段，将基因片段经过Xbopnl双酶切后插入到pGEM—3Z质粒中，兰白斑筛选重组质粒，提取质粒，Hindlll酶切、ienow酶补平、EcoAI二次酶切，切下带粘平端的ORFS基因片段，插入经Ndel酶切冲平／EcoM二次酶切的原核表达载体 pET6 中，筛选重组质粒，完成Ogys基因片段的非融合原核表达载体的构建。重组质粒转化进受体菌 BL21（DE3），IPTG诱导 GPV ORFS基因的非融合表达，SDS—PAGE分离表达产物，发现诱导后产生一个50KD左右的蛋白组份，与根据基因序列推导出的蛋白质分子量相近，western杂交分析表明，该诱导出的蛋白可与GPV发生血清学反应。 RT—PCR扩增的ORFS基因片段用Xbal／Knl双酶切后插入到带相同双酶切位点的含有Emu启动子和Nos终止子的质粒pEmu－mes－N之中，构建成用于小麦转化的植物表达载体 pPPI（ORFS重组质粒人利用花粉管通道方法，与含有Bar基因的质粒pACH—20进行双质粒共转化，转化品种选自我国小麦黄矮病高发区的高产、优质、不抗病的小麦品种陇鉴127、晋麦47，每个品种转化小花数均在1000个以上，收获种子数分别为74粒和sl4粒。 播种转化种子，提取小麦总DNA，进行PCR检测，结果得到3株阳性的 T。代植株，2株为陇鉴 127、l株为晋麦 47。对阳性植株的 DNA进行PCR、PCRSouthem、Southern分析，均获得阳性的杂交结果。表明转基因小麦后代中存在看己整合进染色体的GPV株系ORFS基因。