论文部分内容阅读
目的:卵巢癌是严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤,死亡率居妇科恶性肿瘤之首。因为卵巢深居盆腔,又缺乏诊断卵巢癌的高度敏感指标,导致60%—70%患者确诊时已属晚期。因此,卵巢癌的诊断及预后一直是妇科临床工作者研究的重点和热点。近年来Hedgehog信号通路在恶性肿瘤中的作用已成为研究热点,Hedgehog信号通路的异常激活与肿瘤的发生发展密切相关,参与调控恶性肿瘤细胞的发生、发展、增殖及侵袭转移过程。本实验采用细胞培养、MTT法、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测添加Hedgehog信号通路激动剂—Shh多肽后,通路转录因子Gli1及其下游靶基因Foxm1在卵巢癌细胞株Skov3中的表达变化及其细胞生长变化,探讨Hedgehog信号通路中Gli1和Foxm1在卵巢癌细胞株Skov3中的表达情况及其对卵巢癌细胞Skov3增殖的影响,为临床卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的理论基础。方法:1培养卵巢癌Skov3细胞株。2(1)实验组:添加Hedgehog信号通路激动剂Shh(Human Sonic Hedgehog)多肽(200ng/ml);(2)对照组:不添加Hedgehog信号通路激动剂Shh多肽。3应用MTT法检测各组卵巢癌Skov3细胞在24h、48h、72h的增殖情况。4采用实时荧光定量PCR法检测各组卵巢癌Skov3细胞中24h、48h、72h Gli1m RNA和Foxm1m RNA的表达情况。5 Western blot法检测各组卵巢癌Skov3细胞中24h、48h、72h Gli1和Foxm1蛋白表达的情况。6用SPSS21.0统计软件对所有数据进行统计学分析。所有数据为正态分布,以均数±标准差((?)±s)方式表示,两组间均数比较用t检验,P<0.05为有统计学意义。结果:1 MTT法检测各组细胞增殖情况:24、48、72小时,实验组较对照组细胞增殖速度明显加快,统计学上有显著差异(P<0.05)。2实时荧光定量PCR法检测24h、48h、72h两组细胞中Gli1m RNA和Foxm1m RNA的表达情况:实验组Gli1m RNA和Foxm1m RNA在24h、48h、72h的表达量与对照组相比均明显升高,统计学上有显著差异(P<0.05)。3 Western blot法检测24h、48h、72h两组细胞中Gli1和Foxm1蛋白表达情况:实验组与对照组相比,在24h、48h、72h Gli1和Foxm1蛋白表达均明显升高,统计学上有显著差异(P<0.05)。结论:1 Hedgehog信号传导通路激动剂Shh多肽可增加通路活性(Gli活性),促进卵巢癌细胞生长。2 Hedgehog信号传导通路,通过高调Foxm1的表达来促进卵巢癌细胞增长。