论文部分内容阅读
研究目的：
1.动态观察阿德福韦酯治疗HBeAg阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者,伴随病毒下降的过程,外周血特异性(HBV特异性CD4+T细胞功能)和非特异性免疫细胞(Treg细胞以及NK细胞受体NKG2D表达)的改变,与HBeAg血清学应答的相关性。进一步探讨病毒动力学下降对宿主免疫功能的影响及抗病毒治疗的病毒免疫学机制。
2.比较抗病毒治疗的病毒动力学早期阶段(0-12周),肝脏局部病毒的清除动力学和肝组织免疫细胞的改变,对HBeAg血清学转换的影响。进一步探讨肝脏局部抗病毒治疗的病毒免疫学机制。
研究方法：
入选13例HBeAg阳性CHB初治患者,所有患者均予阿德福韦酯治疗10mg/天,随访治疗1年。在治疗前、治疗后2周、4周、8周、12周、16周、20周、24周、36周、48周留取肝素抗凝全血作为随访检测标本,部分全血分离外周血单核细胞冻存,分批进行检测。其中8例患者治疗前和治疗后12周各行肝活检一次,留取肝组织样本进行检测。
1.监测抗病毒治疗过程血清HBV-DNA、HBeAg、HBsAg的水平,BrdU淋巴细胞增殖试验检测相应随访时间点的T细胞增殖率,酶联免疫斑点试验检测分泌干扰素-γ的HBV特异性CD4+T细胞频数,以评价抗病毒治疗后病毒的下降对HBV特异性T细胞功能的影响。
2.多色流式细胞术检测抗病毒治疗过程,CD4+CD25+Treg细胞数量和NK细胞活化受体NKG2D的表达。
3.实时荧光定量PCR检测治疗前和治疗后12周肝脏组织病毒(cccDNA、HBVDNA)载量,比较治疗前后肝脏组织病毒载量的动态改变。
4.免疫组化法分析治疗前和治疗后12周肝脏组织免疫细胞(CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞)和细胞因子干扰素-γ的动态表达。
结果：
1.阿德福韦酯治疗48周时,13例患者有9例HBVDNA阴转(9/13,69％)；4例出现HBeAg的阴转(4/13,30％),其中2例出现Anti-HBe(2/13,15％)。治疗36周和48周时,HBeAg阴转的患者血清HBVDNA下降较未阴转的显著(P<0.05)。
2.伴随病毒载量的下降,HBeAg阴转组治疗后HBV抗原特异性CD4+T细胞应答较治疗前增强,分别在治疗12周和出现HBeAg阴转时达到峰值(P<0.05),而HBeAg未阴转组治疗后较治疗前无显著增强。与HBeAg未阴转组比较,在治疗前和治疗后各随访点,HBeAg阴转组HBV抗原特异性CD4+T细胞应答都较前者显著增强(P<0.05)。HBeAg阴转组治疗后HBV抗原特异性T细胞增殖能力一过性增强,而HBeAg未阴转组无T细胞增殖应答。表明病毒载量下降后,部分患者出现HBV特异性T细胞应答功能的增强,并实现了HBeAg血清学应答。
3.伴随血清HBV-DNA的下降,Treg的数量逐渐下降,4周后趋于稳态；而NK细胞活化受体NKG2D在治疗后8周开始上升,48周时达到峰值(P=0.000)。HBV-DNA和Keg之间呈正相关性趋势(r=0.808,P=0.000),与NKG2D间呈负性相关趋势(r=-0.734,P=0.000)；Treg的数量和NKG2D的表达趋势和升降幅度在HBeAg转换组和HBeAg未转换组间没有显著差异。
4.ADV治疗12周后肝组织总HBVDNA平均下降1.52log10,肝组织cccDNA下降1.92log10；近98％左右的肝脏病毒量在治疗的早期被清除。同步比较外周血HBVDNA平均降低99.72％,肝脏局部和外周血病毒的清除动力学相一致。
5.治疗前HBeAg阴转组的肝组织HBV DNA和cccDNA水平低于HBeAg未阴转组。同时,治疗12周时HBeAg阴转组的cccDNA水平低于HBeAg未阴转组。
6.有4例患者治疗12周后肝组织CD8+T细胞和NK细胞的平均阳性面积和汇管区阳性细胞数较治疗前增加,其中3例是HBeAg阴转的患者,仅1例是HBeAg未阴转患者。这提示治疗后肝组织免疫效应细胞的增加,可促使抗病毒免疫功能的恢复,有利于HBeAg的转换。
结论：
1.阿德福韦酯抗病毒治疗的病毒动力学,早期是药物的抑制作用,后期免疫功能的恢复促使病毒的进一步清除。外周血与肝脏的病毒清除动力学是一致的。36周血清HBVDNA阴转与HBeAg转换密切相关,是阿德福韦酯治疗CHB患者HBeAg血清学转换的预测因素。
2.阿德福韦酯抗病毒治疗过程,病毒负荷下降,外周血和肝脏局部特异性和非特异性免疫细胞功能均有恢复；部分患者HBV特异性免疫功能呈一过性增强与HBeAg阴转密切相关,而非特异性免疫功能呈持续增强；进一步证实HBV特异性T细胞功能的恢复是促使病毒清除,实现HBeAg血清学转换的关键因素。