论文部分内容阅读
表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)是表皮生长因子受体家族成员之一,是原癌基因c-erbB 1的表达产物,分子量大约170kd.EGFR可通过直接和间接两条途径被激活。活化的EGFR可通过下游信号导通路激活基因转录因子,进而启动细胞核内有关基因的转录、调节蛋白合成、细胞分裂、增殖和分化和炎症性反应等。锌也普遍存在于空气微细颗粒污染物中。锌在颗粒物所含多种金属中所占比例最高。当前的主导观点认为空气微细颗粒物的呼吸道毒性与其化学成分,尤其与某些可溶性金属离子相关。体内研究发现,吸入含锌颗粒物或者气管滴注锌盐溶液均能引起呼吸道炎症。体外研究显示,外源锌离子可激活细胞内多个信号传导通路,如表皮生长因子受体(EGFR)等。EGFR磷酸化启动了呼吸道上皮细胞信号通路,在组织修复及正常的细胞的动态平衡过程中起到重要作用。但是EGFR在锌离子致呼吸道损伤过程中的作用还不清楚。研究目的探讨锌离子对大鼠呼吸道EGFR表达及活化的影响以及EGFR在锌离子诱导呼吸道炎症过程的作用。材料与方法1.复制动物炎症模型。清洁级雄性Wistar大鼠30只采用随机分为6组,每组5只,支气管灌注法分别给予PBS和硫酸锌溶液各3组,分别于灌注后4 h、8 h、24 h处死。2. EGFR信号传导通路阻断实验。清洁级雄性Wistar大鼠20只随机分为4组,每组5只。用DMSO或PD153035溶液预灌注各2组,约30min;经过预灌注处理的2组大鼠分别灌注PBS或硫酸锌溶液,于灌注后8h处死。3.观察指标。收集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF),使用ELISA试剂盒检测IL-8和LDH含量;考马斯亮蓝法检测总蛋白渗出情况;计数渗出炎症细胞;肺组织做病理切片观察炎症细胞浸润情况。Western blot检测EGFR表达及Tyr1068活化情况。4.采用统计软件SPSS12.0进行数据分析,数据以x±s表示。应用2×3析因设计方差分析,比较不同灌注液及时间对大鼠急性呼吸道炎症的影响,筛选最佳时间;应用2×2析因设计方差分析,比较预灌注液和灌注液的主效应及其交互作用。检验水准α=0.05。结果1.锌离子能引起大鼠呼吸道炎症。灌注硫酸锌8h后BALF白细胞计数含量为3.44×109/L;灌注PBS 8 h后BALF白细胞计数为1.89×109/L。不同灌注液作用后大鼠BALF白细胞计数(F=12.149,P<0.01)不同。灌注硫酸锌4h、8h和24 h后白细胞计数分别为2.01×109/L、3.44×109/L和1.03×109/L。不同时间点白细胞计数(F=29.569,P<0.01)也不同。2.PD153035能够抑制锌离子引起的呼吸道炎症。不同预灌注液作用后大鼠白细胞计数、总蛋白、LDH和IL-8含量(F=37.872、26.212、28.741和24.347,P<0.01)不同。PD153035预灌注组中硫酸锌所致炎症反应较DMSO组中硫酸锌的作用明显减弱;PD153035硫酸锌组EGFR表达量(271.818)及Tyr1068磷酸化(239.676)较DMSO组明显减少(436.320和428.360)。结论硫酸锌溶液能够引起大鼠呼吸道急性炎症;硫酸锌可致大鼠呼吸道细胞内EGFR磷酸化;PD153035可明显减弱硫酸锌所致的EGFR磷酸化和大鼠呼吸道急性炎症程度。