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目的:探讨乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)整合到宿主细胞基因组的可能致癌机制。并尝试构建HBV与肝细胞相互作用的体外模型,以研究HBV致癌的分子机理及其干预。 材料与方法:随机选取7例HBsAg阳性的中国启东高发区肝细胞癌组织进行HBV整合位点分析。用Alu-PCR技术或“Genome Walking”技术对所提取的组织DNA进行HBV X基因和侧方未知序列的PCR扩增。并对所获得的PCR产物进行序列测定。通过Entrez BLAST系统分析肝癌组织中的HBV X基因整合状态,重点分析HBV DNA是否整合插入细胞生长调控有关的重要基因。 为研究HBV表达体系,首先将全基因组HBV克隆至高效逆转录病毒表达载体pCLXSN,构建pCLXSN-2HBV重组质粒。用PCR、序列测定等方法对新建质粒进行鉴定后,将其导入HepG2细胞和经hTERT处理的体外培养的成人肝细胞,用ELISA及免疫组织化学等方法检测HBV基因组的表达情况。