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目的：运用流式细胞术(Flow cy tome try, FCM)优化现有微粒的检测方法,并以此方法观察冠心病患者外周血红细胞微粒(RMP)、白细胞微粒(LMP)、血小板微粒(PMP)、内皮细胞微粒(EMP)的水平变化,发现冠心病潜在的预测指标。在此基础上,进一步研究冠心病不稳定性心绞痛(unstable angina pectoris, UA)与稳定性心绞痛(stable angina pectoris, SA)及血瘀证与非血瘀证之间关于微粒的差异变化及相关性,从外周血微粒的角度揭示冠心病的形成和发病机制,为冠心病的临床研究提供新的思路。方法：选取2014年3月至2015年2月于中国中医科学院广安门医院心内科住院治疗的冠心病患者120名,采用同期广安门医院南区体检中心正常志愿者31名作为对照组。将冠心病患者分为UA组和SA组,以及血瘀证组和非血瘀证组。于清晨对所有受试者空腹抽取静脉血,并由柠檬酸钠抗凝。运用梯度离心的方法制备无血小板血浆(platelet-free plasma, PFP),将PFP存于-80℃冰箱内,在2周内利用流式细胞仪完成检测。将检测的四种来源的微粒按照大小和标记方法不同分为18项指标,分析该值与冠心病的相关性,并用ROC分析方法筛选对冠心病预测的潜在指标。方法学部分采用冠心病不稳定心绞痛患者的血浆,利用高速离心机和流式细胞仪探讨不同离心力和离心时间中微粒的检测水平及有效获取微粒的方法。结果：1在离心力为13000g的离心条件下,对于SMP,不同离心时间3min>6min(P< 0.01),6min>10min(P<0.01),10min>15min(P<0.01);对于BMP,不同离心时间3mmin>6min(P<0.01),6min>10min(P<0.01),10min>15min(P<0.05);对于血小板,不同离心时间3min>6min(P<0.01),6min>10min(P<0.01),10m in>15min(P<0.05).在离心时间为30min的离心条件下,不同离心力16000g<18000g<20000g<22000g,仅18000g与20000g之间存在统计学差异(P<0.05)。2 冠心病不稳定性心绞痛患者血浆中SMP明显多于BMP(P<0.01)；单标记的MP数量明显多于多标记检测到的数量(P<0.01)。3冠心病组血浆中SMP(AV+)、SRMP(CD235+)、SPMP(CD41a+)、SLMP (CD45+)、 SRMP(AV+/CD235)、SPMP(AV+/CD41a+)、SLMP (AV+/CD45+)、SEMP(AV+/CD144+)、BMP (AV+)、BRMP(CD235+)、BPMP(CD41a+)、BLMP(CD45+)、BEMP(CD144+)、BRMP(AV+/ CD235+)、BPMP(AV+/CD41a+)、BLMP (AV+/CD45+)、BEMP(AV+/CD144+)明显高于健康对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),此17种微粒与冠心病呈正相关(P<0.05或P<0.01)；将微粒按大小以及标记方法分组,每组内经逻辑回归后,BPMP(AV+／CD41a+)、SLMP(AV+/CD45+)、BMP(AV+).SMP(AV+)为冠心病最显著的独立危险因素,经受试者工作特征曲线(receiver operating characteri stic curve,ROC)分析,曲线下面积(AUC)分别是0.79、0.732、0.777、0.676,确定最佳阈值分别是472counts/μ1、530counts/μ1、462counts/μ1、922counts/μ1。4 冠心病不稳定性心绞痛组SMP(AV+)、SRMP(CD235+)、SPMP(CD41 a+)、 SLMP(CD45+)、SRMP(AV+/CD235+)、SPMP(AV+/CD41a+)、SLMP(AV+/CD45+)、BMP(AV +)、BRMP(CD235+)、BPMP(CD41a+)、BLMP(CD45+)、BEMP(CD144+)、BRMP(AV+ /CD235+)、BPMP(AV+/CD41 a+)、BLMP(AV+/CD45+)、BEMP(AV+/CD144+)水平明显高于冠心病稳定性心绞痛组,差异具有统计学意义(P<0.05 或P<0.01)；上述指标除BEMP(AV+/D1 44+)夕,其余15种微粒与冠心病不稳定性心绞痛呈正相关(P<0.05或P<0.01)。5冠心病血瘀证组SMP(AV+)、SRMP(AV+/CD235+)、SPMP (AV+/CD41a+)、SLMP (AV+/CD45+)、BMP(AV+)、BRMP(CD235+)、BPMP(CD41a+)、BLMP(CD45+)、BEMP(CD144 +)、BRMP(AV+/CD235+)、BPMP(AV+/CD41 a+)、BLMP(AV+/CD45+)水平明显高于冠心病非血瘀证组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),此12种微粒均与冠心病血瘀证呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论：1 在13000g 10min这个条件下血小板在富含微粒的血浆中相对较少,因此可以有效防止由于冻存或者较多的血小板活化、破裂而产生的更多的微粒；在20000g30min这个条件下可以使血浆中所有的微粒基本沉淀,这不仅仅可以清洗掉过多的未结合抗体,又可以避免因加入Anniex V和binding buffer活化血浆中的凝血系统,并可作为微粒提取和纯化的有效方法。2 单标法检测的微粒数量多于双标法检测的微粒数量；血浆中小微粒的数量多于大微粒的数量。3 冠心病患者血浆中RMP、PMP、LMP、EMP的水平高于健康组；其中,SMP(AV+)、 BMP(AV+)、SLMP(AV+/CD45+)、BPMP(AV+/CD41a+)对冠心病有较强的诊断作用,这四个指标的最佳诊断阈值分别是922count s/μ1、62 counts/μl、530counts/1、 472counts/μ1;此四种微粒在冠心病诊断方面均有较好的敏感性和特异性,其中,BPMP(Av+/CD41+)是本实验中最强的冠心病诊断指标。4 冠心病不稳定性心绞痛患者血浆中RMP、PMP、LMP、EMP的含量高于稳定性心绞痛患者,且RMP、PMP、LMP、EMP的水平与冠心病不稳定性心绞痛呈正相关；表明微粒与冠心病严重程度密切相关,可能提示冠心病的病情变化。5冠心病血瘀证患者血浆中RMP、PMP、LMP、EMP的含量高于非血瘀证患者,且RMP、PMP、LMP、EMP的水平与冠心病血瘀证呈正相关,提示微粒可有望成为冠心病血瘀证病情发展的预测指标及中医辨证的参考指标。