目的:本试验通过建立犬皮肤三度烧伤模型,初步探索骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗犬皮肤三度烧伤的效果及可能机制,为治疗犬三度烧伤提供理论依据。方法:1.犬皮肤三度烧伤模型建立采用热水间接烫伤法建立烧伤模型,用97℃热水间接烫伤时间为18s、23s、28s、33s,通过临床观察和组织病理学观察,确定97℃热水间接烫伤模型建立的最佳时间。2.BMSCs治疗烧伤的效果观察选取6只健康的犬做正常组,36只烧伤模型试验犬分模型组、磺胺组、BMSCs组。采用CM-Dil标记BMSCs,在烧伤部位四周皮下注射4×10~6个BMSCs,第7、14、21、28天取皮肤做冰冻切片,观察BMSCs的迁移分布情况;第7、14、21、28天观察伤口的愈合情况,计算愈合率;第14、21、28天取材固定做HE染色观察的组织学变化,马松染色观察胶原纤维的分布排序,天狼星红染色观察Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维分布。3.BMSCs治疗烧伤的可能机制6只健康的犬做正常组,选取36试验犬只制备烧伤造模分模型组、磺胺组、BMSCs组。第7、14、21、28天取正常组、模型组、磺胺组、BMSCs组的皮肤组织,ELISA法测定皮肤组织中TGF-β1、α-SMA、IL-6、TNF-α、b FGF、VEGF各个阶段的含量。第28天取正常组、模型组、磺胺组、BMSCs组的皮肤固定,免疫组织化学法检测CD34,计算MVD值。结果:1.成功建立犬皮肤三度烧伤模型33s烧伤有硬痂皮,皮肤组织全层被破坏,但伤及皮下肌肉,烧伤程度较深;28s烧伤有硬痂皮,皮肤全层被破坏,表皮和真皮的凝固性坏死,皮下肌肉的损伤较轻微;18s、23s烧伤有水疱和血肿形成,表皮层和真皮层的部分受损伤。综上所述,根据皮肤三度烧伤模型建立标准,确定97℃热水间接烫伤28s为三度烧伤模型建立的最佳方法。2.BMSCs治疗烧伤的效果CM-Dil标记的BMSCs,移植到皮肤中,第7天BMSCs个数和荧光强度达到峰值,之后BMSCs个数逐渐减少,荧光强度减弱,第28天皮肤组织中仍有标记的BMSCs存在;7、14、21、28天BMSCs组愈合率与模型组相比显著升高（P<0.05）;第7天BMSCs组与磺胺组相比差异不显著（P>0.05）,磺胺组与模型组差异不显著（P>0.05）;第14、21、28天BMSCs组与磺胺组相比显著升高（P<0.05）;磺胺组与模型组相比显著升高（P<0.05）;14天模型组少量血管,肉芽组织生成,大量炎性细胞;磺胺组肉芽组织和毛血管生成,炎性细胞较多;BMSCs组大量新生血管和肉芽组织,炎性细胞较少。第21天模型组纤维排列不规则,新生血管减少,角化过度,表皮层增厚;磺胺组新生血管减少,纤维排列疏松,表皮层较厚;BMSCs组新生血管减少,纤维排列有序;第28天模型组棘层肥厚,不规则增生,角化过度;磺胺组皮肤结构完整,棘层厚薄不一;BMSCs组的各层结构完整;第14天至28天模型组胶原纤维由少量到胶原纤维含量增多,排列无序且胶原纤维排列致密,由瘢痕化的趋势,最终形成瘢痕;磺胺组胶原由含量少到多,排列逐渐有序,但是排列密集,有瘢痕化的趋势;BMSCs组胶原含量增多,排列较疏松有序,无瘢痕生成;BMSCs组Ⅰ胶原纤维含量最少,磺胺组次之,模型组Ⅰ型胶原纤维含量最多;BMSCs组Ⅲ型胶原纤维含量最多,磺胺组次之,模型组Ⅲ型胶原纤维含量最少。BMSCs组Ⅰ胶、Ⅲ型胶原纤维比例接近正常组织。3.BMSCs治疗烧伤的可能机制第7、14、21、28天,模型组TGF-β1的含量与正常组、磺胺组、BMSCs组相比极显著性升高（P<0.01）;磺胺组与正常组、BMSCs组相比极显著性升高（P<0.01）;BMSCs组与正常组相比极显著性升高（P<0.01）。第7、14、21、28天,模型组α-SMA的含量与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）,第7、14、28天,模型组与磺胺组相比极显著升高（P<0.01）,第21天相比则无差异（P>0.05）;第7、14、21、28天,磺胺组与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）;BMSCs组与正常组相比极显著升高（P<0.01）。第7、14、21、28天,模型组TNF-α的含量与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）,第7天模型组与磺胺组相比显著升高（P<0.05）,第14、21、28天模型组与磺胺组无差异（P>0.05）;第7、14、21、28天,磺胺组与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）;第7、14、21、28天,BMSCs组与正常组相比极显著升高（P<0.01）。第7、14、21、28天,模型组IL-6的含量与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）,第14、21天模型组IL-6的含量与磺胺组相比显著升高（P<0.05）,第7、28天模型组IL-6与磺胺组无差异（P>0.05）;第7、14、21、28天,磺胺组与正常组、BMSCs组相比极显著升高（P<0.01）;BMSCs组IL-6的含量与正常组相比极显著升高（P<0.01）。第7、14、21、28天,模型组VEGF的含量与磺胺组、BMSCs组相比极显著降低（P<0.01）;第7、14、21天模型组与正常组相比极显著升高（P<0.01）,第28天显著升高（P<0.05）;BMSCs组与正常组、磺胺组相比极显著升高（P<0.01）,磺胺组与正常组相比极显著升高（P<0.01）。第7、14、21、28天,模型组b FGF的含量与磺胺组、BMSCs组相比极显著降低（P<0.01）,第7、14、21天模型组与正常组相比极显著升高（P<0.01）,第28天无差异（P>0.05）;第7、14、21、28天,BMSCs组与正常组、磺胺组相比极显著升高（P<0.01）,磺胺组与正常组相比极显著升高（P<0.01）。模型组的积分光密度值（IOD）与正常组、BMSCs组相比极显著降低（P>0.01）,模型组与磺胺组无差异（P>0.05）;磺胺组与正常组、BMSCs组相比极显著降低（P>0.01）;BMSCs与正常组无差异（P>0.05）。BMSCs组MVD值与模型组和磺胺组相比显著升高（P<0.05）,与正常组无差异（P>0.05）;模型组和磺胺组MVD值与正常组相比显著降低（P<0.05）;模型组和磺胺组无差异（P>0.05）。结论:通过97℃热水间接烫伤皮肤28 s,可以建立皮肤三度烧伤模型。用CM-Dil标记BMSCs,在皮肤伤口中被检测到,表明BMSCs在愈合过程中一直存在于伤口中,可能直接地参与烧伤的愈合。BMSCs抑制皮肤组织分泌TGF-β1、α-SMA、IL-6、TNF-α,减少I型胶原纤维和瘢痕的生成,减少炎症的发生,可能通过旁分泌促进VEGF、b FGF的分泌,上调CD34的表达,提高MVD值,促进血管生成和创面愈合。