《黄帝内经》阴阳理论在众多的阴阳相互关系的基础上强调以阳气为主导,认为阳气虚是导致人体疾病发生的重要原因。临床阳虚体质与众多疾病的发生密切相关,而肾阳是人体阳气之根,肾阳虚则全身阳气皆虚,因此,温补肾阳,可以起到很好的改善阳虚体质、预防疾病发生的作用。由于阳虚体质改善过程缓慢,我们需要探究一种有效、安全纠正阳虚体质的方法。金匮肾气丸是治疗肾阳虚的经典方剂,本实验拟对金匮肾气丸加味汤方和膏方两种剂型对肾阳虚大鼠的药效学进行对比,并研究其作用机理,以期为阳虚体质的改善提供一种有效方药。1研究目的针对分布广泛的阳虚质(阳虚证),通过金匮肾气丸加味膏方和汤方干预以灌服腺嘌呤所复制的肾阳虚证大鼠模型,观察金匮肾气丸加味方对肾阳虚大鼠的药效作用,并研究其药理机制。2研究方法选用清洁级SD雄性大鼠40只,以腺嘌呤按200mg/kg剂量灌胃四周复制肾阳虚大鼠模型,造模成功后分为正常对照组、模型对照组、金匮肾气丸加味膏方干预组(简称膏方组)和金匮肾气丸加味汤方干预组(简称汤方组)。膏方组,给予膏方(开水冲溶,冷却至适宜温度)以18.36 g/(kg · d)灌胃;汤方组,给予汤药以18.36g/(kg · d)灌胃;阳虚模型对照组,给予10mL/(kg ·d)蒸馏水灌胃;正常对照组,常规饲养。干预时间持续六周。观察大鼠外观行为、测量体重和尿量,于第六周末取材,检测大鼠性激素如血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、绒毛膜促性腺激素(HCG),肾上腺激素如促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CRE)、17-羟皮质类固醇(17-OH-CS),甲状腺激素如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等激素指标,测定精子质量,肾脏做HE、Masson染色及电镜切片,观察肾脏的病理变化,并评价金匮肾气丸加味膏方与汤方的疗效。3结果3.1 一般状况模型组呈现出肾阳虚症状,如体重下降、反应迟钝、活动能力下降、弓背蜷缩、畏寒、体毛稀疏失去光泽等表现,经膏方和汤方干预后均明显改善,可见活动增多、弓背蜷缩现象消失、体毛逐渐恢复光泽等表现。3.2肾脏形态学3.2.1光镜观察模型组大鼠出现如下改变:(1)肾小球病变:肾小球数目减少,肾小球萎缩,肾小囊腔扩大,肾小球毛细血管呈分叶状并萎缩,球外系膜细胞增多。(2)肾小管病变:肾小管数目减少,可见2,8—二羟基腺嘌呤结晶沉积,有结晶沉积的肾小管管腔扩大,上皮变薄,腔内可见少许脱落的上皮。(3)肾间质病变:肾间质中纤维组织增生明显,可见异物肉芽肿及纤维化病灶形成,肾组织出现严重纤维化。膏方组及汤方组光镜观明显改善,可见:(1)肾小球:肾小球稍微减少,肾小球轻度萎缩,肾小囊腔基本正常,肾小球毛细血管未见萎缩。(2)肾小管:肾小管数目基本正常,肾小管内未见有明显的结晶物。(3)肾间质:肾间质中轻微的纤维组织增生。3.2.2电镜观察与正常组相比,模型组出现如下改变:(1)肾小球:内皮细胞坏死,管腔塌陷,足突融合和微绒毛化,基膜增厚,毛细血管攀塌陷。(2)肾小管:近曲小管微绒毛稀疏、紊乱,可见部分上皮细胞微小空泡变性,并见线粒体空泡变性坏死,上皮细胞细胞质、近曲小管管腔中可见白色结晶物。膏方组及汤方组电镜观得到明显改善。膏方组可见:肾小球中的足突部分融合,部分足突相互穿插镶嵌成栅栏状,紧贴于毛细血管基膜外,基膜轻度增厚,肾小管中的微绒毛密度基本正常,近曲小管中可见少量白色结晶物。汤方组:肾小球的少部分足突恢复栅栏状结构,大多数足突融合,基膜增厚,近曲小管的微绒毛仍比较稀疏,近曲小管管腔中可见白色结晶物。3.3下丘脑—垂体—靶向轴3.3.1下丘脑—垂体—性腺轴与正常组相比,模型组LH含量显著下降(p<0.05),经干预后,膏方组与汤方组LH显著升高(p<0.05),与汤方组相比,膏方组LH均值更高。与正常组相比,模型组E2含量显著下降(p<0.05)。经干预后,汤方组E2较模型组显著升高(p<0.05),膏方组含量亦有升高的趋势,但无显著性差异。与模型组相比,膏方组和汤方组T含量显著升高(p<0.05)。与正常组相比,模型组17-OH-CS含量显著升高(p<0.05)。经药物干预后,汤方组较模型组含量显著下降(p<0.05),膏方组有下降的趋势,但无显著性差异。3.3.1下丘脑—垂体—甲状腺轴与正常组相比,模型组T4含量显著下降(P<0.05)。与模型组相比,膏方组含量显著升高(P<0.05),汤方组亦有升高的趋势,但无显著性差异。3.4精子质量模型组精子活动率较正常组显著下降(p<0.05),膏方组较模型组显著升高(p<0.05)。与正常组相比,模型组向前运动的A级精子百分率显著下降(p<0.05),经膏方干预后显著升高(p<0.05),汤方组亦有升高的趋势,但无显著性差异。4结论1金匮肾气丸加味汤方、膏方均能明显改善肾阳虚大鼠的整体生命体征,包括其弓背蜷缩、体毛稀疏、活动减少等典型肾阳虚表现,改善腺嘌呤所导致的大鼠肾脏的形态学病理损伤,提高下丘脑—垂体—性腺轴和下丘脑—垂体—甲状腺轴的功能状态,因此金匮肾气丸加味能够对腺嘌呤所复制出的肾阳虚证有显著改善作用。2比较而言,金匮肾气丸加味膏方对大鼠肾阳虚模型的LH、T4提升作用、对精子活力的改善等,均较汤方效果更好;而汤方提高E2含量的作用,优于膏方。