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大多饲用木聚糖酶在畜禽消化道内的稳定较差,开发在畜禽消化道内活性稳定的新型木聚糖酶是提高其应用效果的关键。本论文通从耐粗饲内蒙古黑猪成年母猪后肠中筛选出具有较强木聚糖降解活性和优良酶学性质的木聚糖降解菌,并对其相关基因进行克隆,为开发新型饲用木聚糖酶提供材料。木聚糖降解菌分离鉴定。以木聚糖为唯一碳源,利用透明圈法从耐粗饲内蒙古黑猪成年母猪后肠筛选出2株具有较高木聚糖降解能力的细菌ZF和MZ。通过形态学观察、培养特性研究以及16S rDNA序列分析,鉴定ZF和MZ分别为兼性厌氧产黄纤维单胞菌(Cellulomonas flavigena)和类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)。ZF和MZ生长、产酶和饲草纤维降解研究。结果表明,ZF培养48 h达菌体高峰,60 h达产酶高峰;MZ培养24 h达菌体高峰,60 h达产酶高峰。与木聚糖作为唯一碳源相比,以苜蓿、羊草和青贮玉米混合物为碳源时,ZF和MZ木聚糖酶产量分别提高了51.3和16.8倍。瘤胃液对苜蓿、羊草、青贮玉米的NDF、ADF降解率均高于筛选菌,但是对于羊草ZF表现出优于瘤胃混合菌的NDF降解能力。ZF和MZ对3种饲草NDF、ADF降解率差异不明显。ZF和MZ粗酶酶学性质的研究。结果表明,ZF和MZ所产木聚糖酶最适温度分别为55和60℃,最适pH为7.0和6.0,在pH 3.09.0范围内稳定。ZF和MZ所产木聚糖酶均具有很好的胃蛋白酶、胰蛋白酶抗性,40℃温育60 min后仍保持80%以上的活性。在pH 6.0,40℃条件下,对于MZ木聚糖酶,Fe2+、Mn2+有较强的抑制作用,Ca2+、Mg2+有较强的激活作用,Cu2+、Zn2+抑制作用不明显。ZF所产木聚糖酶活性受金属离子影响较小。根据糖基水解酶第10家族(GH10)和第11家族(GH11)保守区域设计2对简并引物,利用降落PCR和热不对称交错(TAIL)-PCR获取全长木聚糖酶基因。来源于产黄纤维单胞菌菌株ZF的木聚糖酶基因片段11ZF-2 (1 931 bp),同Cellulomonas flavigena DSM 20109第11家族糖基水解酶相似性最高达84%。来源于类芽孢杆菌菌株MZ的木聚糖酶基因片段10MZ-2(1 860 bp),同Paenibacillus sp.oral 786 str.D14木聚糖酶相似性最高达78%。