重组人-α干扰素基因(Hu-IFN-α)在草鱼体内的整合与表达

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:choasy
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草鱼年产量占中国淡水鱼总产量的20﹪.其生长快、饲料来源广、饲养成本低和肉味鲜美.但草鱼病害多,危害严重,目前草鱼虫苗种养至成鱼的成活率仅为10-15﹪,每年给中国淡水养殖业造成数亿元经济损失.特别是病毒性的草鱼出血病,流行季节长,发病死亡率高,因此,对草鱼出血病的有效防治一直是世界各国水产科学工作者艰苦探索而又未能找到理想解决办法的世界性难题.现代分子生物学技术突飞猛进的发展为我们切底解决这一难题提供了可能性和有效途径.综观国内外近些年来对转基因鱼的研究及结果证明,通过转基因定向培育出符合人们所需要的优良鱼种是完全可能的,也是十分有意义的.通过基因转移进行鱼类抗病育种研究,是鱼类转基固研究中的一个新的方向. 实验通过将hu-α-IFN基因重组分子采用显微注射法将这种重组基因转化草鱼1-2细胞期的受精卵,即以Narashige显微注射仪,将5nl DNA(约10<6>~10<7>分子)直接注射到选择好的受精卵核的动物极上.2000年共显微注射32197粒草鱼受精卵,出苗12945尾草鱼鱼苗,经孵化培育最后获得1120尾五寸左右草鱼,对1120尾草鱼提取血液总DNA进行PCR和Southern杂交检测,2000年转导的草鱼的PCR检测结果,有672尾草鱼即60﹪转化个体的总DNA能扩增出一条485kb的特异分子带,说明转化个体整合有hu-α-IFN基因,经Southern杂交进一步证实,转入的抗病相关基因已在转基因草鱼体内染色体上得以整合,但整合位点没有固定区域,整合的拷贝数存在较大差异.对PCR呈阳性的草鱼672尾个体进行ELISA检测,在158尾草鱼中检出有人α-干扰素的表达即阳性率为23.5﹪,但基因表达水平在个体间有很大差异,对ELISA检测呈阳性的转基因草鱼接种草鱼出血病病毒的攻毒试验,证明了转基因鱼对草鱼出血病毒的抗性比普通草鱼提高了60-70﹪.
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