论文部分内容阅读
目的：本研究通过建立小鼠转CD59卵巢癌细胞(WTA2780细胞)肿瘤模型,用低强度氦氖激光照射荷瘤小鼠胸腺区,以探讨氦氖激光照射对荷瘤小鼠T细胞CD59表达及细胞活化信号转导的作用,为肿瘤的靶向治疗开辟一条新途径。方法：选取BALB/C纯系小鼠随机分为四组：Ⅰ组,正常对照组,不做任何处理。Ⅱ组,致瘤组,仅致瘤但不进行激光照射。Ⅲ组,致瘤后每日进行胸腺区激光照射。Ⅳ组,致瘤后隔日进行胸腺区激光照射。记录肿瘤生长曲线,于第20天处死小鼠,分离培养小鼠胸腺T淋巴细胞。用CD59单克隆抗体作用各组T细胞,采用激光共聚焦显微镜检测Fluo-3/Am负载的T细胞胞浆内钙离子的变化、流式细胞术检测T细胞活化为CD25+T细胞的能力；MTT法(淋巴细胞转化试验)测T细胞增殖、免疫组化和免疫荧光测T细胞表面CD59的表达、ELISA检测T细胞活化后白细胞介素2生成水平,并采用免疫组化的方法检测肿瘤组织CD59表达情况。采用方差分析比较各组间的差异。结果：腋窝皮下注射5×107WTA2780细胞,成功构建了小鼠肿瘤模型。激光照射组(Ⅲ、Ⅳ组)瘤体直径、重量均小于非激光照射组(Ⅱ组)；加入CD59-mAb lmin后,进行T细胞浆内钙离子浓度检测,结果显示Ⅱ组低于Ⅰ组,Ⅲ、Ⅳ组高于Ⅱ组,Ⅲ、Ⅳ组间无明显差异；各组T细胞经CD59mAb刺激48h后,CD25+T细胞表达检测显示Ⅱ组明显低于Ⅰ组,Ⅲ、Ⅳ组明显高于Ⅲ组,Ⅲ、Ⅳ组间无明显差异；荷瘤小鼠T细胞增殖率低于正常小鼠,激光照射组高于未照射组；免疫组化可见荷瘤小鼠T细胞光密度低于正常,而激光照射后的荷瘤小鼠T细胞光密度高于未照射组；免疫荧光结果显示,荷瘤小鼠T细胞荧光强度低于正常小鼠,激光照射组则明显高于未照射组,而每日照射组和隔日照射组之间未见明显差异；酶联免疫吸附试验结果表明,II组T细胞的IL2表达低于Ⅰ组,激光照射后荷瘤小鼠IL2表达增加。各项结果均显示,Ⅱ组和Ⅰ组间差异P<0.01;Ⅲ、Ⅳ组和Ⅱ组间差异P<0.01；Ⅲ组,Ⅳ组间P>0.05。结论：荷瘤小鼠T细胞表面的CD59表达降低、活化信号减弱；但经激光照射后荷瘤小鼠T细胞表面CD59表达量及活化信号明显增强。由此证明He-Ne激光照射胸腺区具有促进荷瘤小鼠T细胞CD59表达及增强T细胞活化信号转导的作用。本研究为卵巢癌基因靶向治疗提供新思路,为激光在肿瘤领域中的应用开辟了新途径,具有重要理论意义及临床应用价值。