北冬虫夏草子实体最佳培养条件探索及其有效成分检测方法的优化

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北冬虫夏草(Cordyceps militaris(vuill.)Fr.)与冬虫夏草(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc)同属不同种,临床功效近似;前者有望作为后者的替代品入药应用。且后者的自然资源极其有限,而前者子实体的固体发酵生产已获成功。因此探索优化前者子实体的培养条件,以利于其工业化大规模生产,具有重要的研究意义。一、北冬虫夏草子实体最佳培养条件的确定本文首先采用正交设计的方法,对北冬虫夏草子实体固体培养条件进行五因素四水平的研究,得到了最佳培养条件的组合。二、现有虫草有效成分提取、测定方法的优化及检测结果(一)虫草素的提取、测定方法的优化及检测本文通过对不同的色谱条件、乙腈浓度、pH值、流速、柱温的考察,确定流动相组成为6%乙腈、0.01mol/L KH2PO4的超纯水溶液,流速控制在0.6ml/min,检测限设置为0.02时,为检测虫草素最适条件。依本文确定的优化检测条件,检测并比较了所培养的北冬虫夏草子实体及青海产野生冬虫夏草中虫草素含量。(二)虫草酸提取方法的优化及含量测定本文通过分别对同一虫草样品连续浸提不同时间的比较,确定以6.5h为提取时间,提取虫草酸最充分,提取效率最高。依本文确定的优化提取方法,分别提取并检测了所培养的北冬虫夏草子实体及青海产野生冬虫夏草的虫草酸含量,且对结果进行了比较,二者虫草酸含量相近,北冬虫夏草略低。(三)虫草多糖的提取及含量测定首先用Fehling法及红外光谱法对培养北冬虫夏草及野生冬虫夏<WP=61>草的多糖成分进行了定性检查。然后用硫酸蒽酮法,对其所含多糖成分进行定量测定。(四)氨基酸的提取及含量测定对培养北冬虫夏草及野生冬虫夏草干燥样品进行水解,利用氨基酸自动分析仪,检测其氨基酸组成及含量。将正交设计这一统计学方法,应用于北冬虫夏草子实体固体培养条件的探索。通过对培养条件进行五因素四水平的考察,得到最佳培养条件的组合。大大缩短了子实体萌发、生长的时间,为北冬虫夏草工业化大规模生产奠定了基础。以青海产冬虫夏草为标准实验材料,细致深入地考察了现有测定冬虫夏草有效成分虫草素和虫草酸的方法,得出了提取和检测的优化方法。从而利于建立统一的衡量标准,准确检测各种虫草及虫草不同部位的有效成分的含量。采用优化后的方法,在相同的条件下,检测了青海产冬虫夏草和最佳培养基培养的北冬虫夏草的有效成分。比较二者虫草素、虫草酸、多糖及氨基酸含量差异。证明北冬虫夏草和冬虫夏草在主要有效成份上近似;从而有望作为后者的替代品入药应用。
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