研究背景与目的:C反应蛋白（C-reactive protein,简称CRP）是目前最有价值的急性时相反应蛋白,通过与多种或外源性配体结合形成免疫复合物并特异性识别血清补体（C1q）,然后通过激活经典的补体途径,参与到机体非特异性的免疫,因此它的变化可以辅助医师判断炎症有关疾病的病理状态。现已证实CRP不仅是一种非特异性的炎症标志物,而且动脉粥样硬化性血栓形成性疾病、静脉血栓栓塞症、冠状动脉硬化症等疾病会直接导致CRP浓度发生变化。正常血清中CRP浓度微乎其微,基本上小于10 mg/L。然而当机体发生炎症时,CRP浓度极骤上升,随着炎症的恢复降至正常水平。同时,CRP作为标志物不受放疗、化疗、皮质激素治疗等的影响,因此CRP的检测对疾病早期诊断、术后检测、疗效观察以及预后判断具有重要意义。目前CRP的临床检测主要采用非均相免疫分析为主的酶联免疫法、免疫比浊法、胶体金免疫层析法。非均相的免疫分析测定意味着一旦免疫反应达到平衡,在检测前必须将结合的标记物与未结合的标记物分开,这需要在测定过程中因分离和洗涤而延长反应时间,并可能增加一些误差,导致敏感性和准确度降低。利用单线态氧分子能量传递的光激化学发光（Light Initiated Chemiluminescent Assay,LICA）免疫测定技术是一种均相免疫检测在检测过程中则无需分离、清洗步骤。该技术的优点是检测范围较宽,灵敏度高,特异性强,快速、稳定,检测用量小。目前,此技术在国内尚未得到广泛应用,主要是因为其主要试剂（感光微球）依赖进口,试剂盒原料昂贵,本课题拟研究制备特异性感光微球解决核心技术关卡,进而以CRP单克隆抗体、CRP重组抗原、发光微球以及生物素为原料,建立一种自有知识产权的CRP均相光激化学发光法检测体系。材料与方法:1.采用高温溶胀吸附法,以酞菁双（三己基硅氧基）硅烷化合物和羧基化聚苯乙烯微球为原料制备感光纳米粒,在此基础上通过羧基氨基反应偶联链霉亲和素制备微球,并且采用马尔文粒径电位分析仪对合成的感光微球进行表征。2.基于LICA技术建立血清CRP光激化学发光分析法的检测体系,确认最佳检测模式,并优化反应条件,包括抗体组合、抗体包被量、生物素化抗体与发光微球的稀释比例、感光微球加样量、反应时间以及检测缓冲液等。3.对本研究建立的血清CRP光激化学发光分析法的检测体系进行方法学评价,包括考察方法的线性检测范围、HOOK效应、准确度、灵敏度、精密度及其在真实样本中的检测情况。结果:1.通过高温溶胀吸附法成功制备出331.3±3.8 nm内粒径可控的感光微球,该微球Zeta电位为-13.9±0.75,Pd I为0.265±0.014,即能够在水溶液中保持稳定的胶体状态,分散性较好,能应用于光激化学发光检测。2.双抗夹心法作为LICA检测血清CRP的最佳分析模式,其分析体系由CRP单克隆抗体包被发光微球、生物素标记CRP单克隆抗体以及特异性感光微球共同组成。经过检测条件优化,采用0.1 M,p H8.0 Tris-HCl缓冲液作为检测缓冲液,抗体组合为生物素-Ab（CRP-11CC）+发光微球-Ab（CRP-1CC）、抗体最佳包被量为1 mg、生物素化抗体稀释度为1:200,发光微球稀释度为1:20、感光微球加样量为175μL、第一阶段反应时间为10 min,第二阶段为5 min作为该检测体系的最佳工作条件。3.本研究初步建立的血清CRP光激化学发光分析法的检测体系具有良好的检测性能。该方法分析灵敏度为0.77 ng/m L,功能灵敏度为1.17 ng/m L;回收实验的加标回收率为88%～106%;高、中、低值血清样本批内变异系数不大于5.71%,批间不大于8.34%,均小于10%;在0～200 mg/L的CRP检测范围内呈良好的线性;高于20倍CRP浓度的干扰物质（血红蛋白、胆固醇、甘油三酯、γ-球蛋白、血清白蛋白）对该方法的测定结果无交叉影响。结论:本论文研究制备了特异性感光微球,并成功将制备的感光微球应用在血清CRP检测分析中,以此开发建立一种自有知识产权的CRP均相光激化学发光法检测体系。特异性感光微球核心技术关卡的突破,有望实现对进口产品的超越,加速国产替代。