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目的:建立内毒素性休克大鼠模型,测定血清二胺氧化酶(DAO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、观察小肠病理改变及小肠iNOS的表达变化,并探讨早期应用不同剂量亚甲兰(MB)对内毒素性休克大鼠肠损伤的影响及MB治疗的剂量效应。方法:第一部分:内毒素性休克大鼠模型的建立及血清DAO活性的变化健康Wistar大鼠32只随机分为四组:①正常对照组:麻醉后分离颈总动脉连接计算机记录心率(HR),平均动脉压(MAP)。至6h时处死取材。②内毒素(LPS)休克2h组。③LPS休克4h组。④LPS休克6h组。以上三组均静脉注入15mg/kgLPS(0111:B4),分别至2h、4h、6h时处死取材。每组大鼠均为8只。采用免疫组化法观察大鼠小肠组织中iNOS的表达变化,应用紫外分光光度法分析小肠组织中iNOS、血清中iNOS、DAO活性变化。光镜观察小肠组织形态学变化。第二部分:不同剂量亚甲蓝对内毒素性休克大鼠肠损伤的影响根据第一部分实验结果,分别选取iNOS、DAO表达最强的时点进行药物干预研究。健康Wistar大鼠40只随机分为五组:正常对照组、内毒素(LPS)休克组、MB低剂量组、中剂量组、高剂量组。除对照组外,其余四组均静脉注入15mg/kgLPS。亚甲兰干预组每只大鼠分别静注5mg/kg、10mg/kg、20mg/kgMB,对照组及内毒素组给予相应剂量的平衡液。各组大鼠于LPS注入后6小时处死取材。检测指标同实验一。结果:(1)LPS可引起大鼠MAP一过性下降,约15min后回升至正常,之后持续缓慢下降约6h后死亡。注入LPS后HR持续增快,约5h后HR骤降直至死亡。LPS可引起血清中DAO、小肠组织中iNOS活性明显升高;小肠iNOS表达增多;小肠病理评分明显高于对照组。休克6h组iNOS表达最多,DAO活性最高。(2)MB可维持MAP、HR在正常范围。MB可减轻iNOS和DAO升高的程度,且与LPS组比较,差异有统计学意义。随MB剂量升高,iNOS活性降低;DAO活性在中剂量组最低;小肠病理评分在中、低剂量组低,但高剂量组与LPS组无统计学差异。结论:(1)LPS是内毒素的主要成分,15mg/kg的LPS可以方便快捷地建立大鼠内毒素性休克模型,并致肠损伤,出现肠管肿胀、出血、渗出,血清DAO活性增高。(2)亚甲兰可稳定血流动力学,通过抑制异常大量释放的iNOS的形成来升高血压,且抑制iNOS呈剂量依赖性。中、低剂量亚甲兰可不同程度地减轻LPS引起的肠损伤,但大剂量亚甲兰反而会加重肠损伤,这可能与高剂量MB强烈抑制iNOS的表达,使NO的合成明显减少,从而抑制了NO的有益作用。