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胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)是一种高度侵袭性的肿瘤,临床症状出现晚,难以早期发现,多数病例发现时已属晚期,是实性肿瘤中预后最差的。如果在胰腺非浸润性癌前病变时期进行有效的干预,将大大提高胰腺癌的生存率。胰腺导管上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia, PanIN)是胰腺导管腺癌最常见最重要的癌前病变。miRNA是一种内源性非编码单链小分子RNA,长度19-24个核苷酸,成熟miRNA发挥癌基因或抑癌基因的作用。本课题组之前的研究中采用芯片技术及定量PCR均证实hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌组织中呈低表达,功能研究提示hsa-miR-96及hsa-miR-217发挥抑癌基因的作用。因此我们提出了这样一个问题：hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌最重要的癌前病变(胰腺导管上皮内瘤变)中是否就出现了表达的异常?hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌形成过程中是否起到一定的作用?对于这些问题目前还没有文献报道。本研究在课题组之前研究结果的基础上用核酸锁定原位杂交(Locked Nucleic Acid In situ Hybridization LNA-ISH)的方法检测了hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌及胰腺导管上皮内瘤变的定位表达情况,以此来了解hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌癌变过程中的作用,以及在胰腺导管腺癌早期诊断中的潜在作用。目的：研究hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺癌的癌变过程中的表达以及在胰腺导管腺癌诊断的潜在作用。方法：(1)收集2008年-2010年北京协和医院手术切除的胰腺石蜡标本,其中病理切片完整的191例,包括胰腺导管腺癌119例、慢性胰腺炎22例及其他的胰腺良恶性肿瘤47例,并进行随访,随访时间为17-50个月,失访2例。。对所有病例的临床资料及病理切片进行重新回顾整理,对PanIN病变进行分级,统计不同类型胰腺病变PanIN的发生率。(2)选取伴有胰腺导管上皮内瘤变的胰腺石蜡标本,包括45例胰腺导管腺癌、10例慢性胰腺炎及5例其他类型胰腺肿瘤。用核酸锁定原位杂交的方法检测miRNA (hsa-miR-96及hsa-miR-217)的表达。所有结果应用SPSS Statistics统计软件进行数据分析。结果：(1)PanIN总发生率在其他类型胰腺肿瘤周边组织、慢性胰腺炎及胰腺导管腺癌的癌旁胰腺组织逐渐升高(分别为24.0%,12/50；54.5%,12/22；70.6%,84/119),三者之间存在显著性差异。胰腺导管腺癌的癌旁胰腺组织中高级另PanIN的发生率(31.1%,37/119)明显高于慢性胰腺炎(0%,0/22)或其他类型良恶性肿瘤周边组织(2%,1/50))(P<0.05)。PanIN的发生率与年龄有相关性,经统计学分析不同年龄组的PanIN发生率有显著性差异(P<0.05)。PanIN随着年龄增加发生率升高。男女性别间的PanIN发生率没有显著性差异。(2)hsa-miR-96和hsa-miR-217的表达随着PanIN级别的升高而降低。hsa-miR-96在PanIN-1、PanIN-2、PanIN-3及导管腺癌中的表达分别为91.3%(22/23)、70.6%(12/17)、22.2%(4/18)及31.1%(14/45)。hsa-miR-217在PanIN--1、PanIN-2、PanIN-3及导管腺癌中的表达分别为95.7%(22/23)、70.6%(12/17)、27.8%(5/18)及42.2%(19/45)。hsa-miR-96及hsa-miR-217在PanIN-2/3中的表达与正常胰腺组织及PanIN-1的表达有统计学差异(P<0.01)。(3)hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌肿瘤细胞的阳性率分别为31.1%及42.2%,而在对应癌旁胰腺组织及慢性胰腺炎中全部有阳性或弱阳性表达,差异具有显著性(P<0.05)。(4) hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌间质纤维母细胞的表达率分别为22.2%和24.4%,较慢性胰腺炎中的77.8%和66.7%亦明显降低(P=0.003)。(5)hsa-miR-96及hsa-miR-217阴性表达与阳性表达之间Kaplan-Meier生存分析,阴性组与阳性组之间生存均无统计学差异。结论：(1)胰腺导管腺癌癌旁组织中发现PanIN特别是高级另IJPanIN的检出率明显高于慢性胰腺炎或其他类型良恶性肿瘤周边组织,支持PanIN是胰腺导管腺癌最常见的癌前病变。(2)在胰腺导管腺癌的癌前病变(PanIN-2/PanIN-3)发现hsa-miR-96及hsa-miR-217的异常表达,提示hsa-miR-96及hsa-miR-217可能在胰腺癌的形成过程中起到重要的作用、可能是胰腺癌早期诊断的潜在生物学标记物。(3) hsa-miR-96及hsa-miR-217在胰腺导管腺癌与慢性胰腺炎存在差异表达。(4)miRNA在胰腺导管腺癌及慢性胰腺炎中的表达差异不仅存在于上皮细胞,间质纤维母细胞间也存在显著差异,这可能为胰腺导管腺癌的微环境研究提供新思路。