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近些年,由网状内皮增生病病毒(REV)、白血病病毒(ALV)、传染性贫血病毒(CAV)、等所造成的家禽免疫抑制性疫病常以亚临床形式感染雏鸡,造成免疫抑制,导致生长迟缓、继发感染增多、疫苗免疫效果低下,给我国养禽业造成每年数百亿的经济损失。对该类病的控制目前仍没有好的措施,根据该病的特点,控制的主要策略应该是将低下的免疫功能提高上来,使用免疫增强剂是很重要的策略。免疫增强剂是非常重要的研究领域,人们开发了一些制剂,但均存在某些缺陷,有待于开发其他更有效的制剂。目前,已经有报道初步证明了松花粉多糖具有免疫增强作用。本研究以泰山松花粉多糖为材料,对其进行微胶囊化,并研究其对REV感染鸡的细胞免疫和体液免疫的免疫调理作用。1.松花粉多糖微囊的制备采集泰山上的松花粉,过筛破壁后用水提醇沉法提取粗多糖,提取的过程中采用胃蛋白酶及Sevage试剂两种方法去除蛋白,保证了粗多糖比较高的纯度。再以植物油为芯材,多种乳化剂、壁材、稳定剂等材料多次预试验的基础之上,确立以大豆分离蛋白与麦芽糊精复配为壁材、大豆卵磷脂为乳化剂、CMC为稳定剂进行松花粉微胶囊的制备。松花粉微胶囊制备的最佳配方为大豆分离蛋白:麦芽糊精2.5:1,壁材:芯材为6:1,固形物浓度20%,CMC用量4g/L;最佳工艺参数为:乳化温度55℃,均质时间5min,均质转速4000rpm。制得的松花粉多糖微胶囊呈淡淡的黄色,粉质细腻,溶解度93%,包埋率79%。2.松花粉多糖微囊对REV免疫抑制鸡的免疫调理作用为了研究泰山松花粉多糖及其微囊对REV感染鸡的免疫增强作用,将120只1日龄雄性、无特定病原(SPF)雏鸡,随机分为6组(每组20只)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于1日龄腹腔注射103TCID50的REV; Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组注射Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM);Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ各于1日龄分别皮下接种松花粉多糖、松花粉多糖微囊乳化液,免疫剂量为400mg/kg体重,连续免疫7天,Ⅲ、Ⅳ组注射生理盐水作为对照。试验第8天,所有小鸡腹腔注射免疫1头羽份的NDV疫苗。各组分别于接种后10、15、20、25、30d采取血液、脾脏和胆汁,用β微量法检测血清抗体,PI染色法检测脾淋巴细胞转化率,用全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率,ELISA法检测胆SIgA含量,鸡γ干扰素酶联免疫吸附测定试剂盒检测IFN-γ。结果显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组显著低于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ组显著高于Ⅲ组(P<0.05);Ⅳ、Ⅴ高于Ⅵ组,并且Ⅰ组高于Ⅱ组。这些结果表明,松花粉多糖及其微囊可以增强REV免疫抑制鸡的体液免疫和细胞免疫反应,证明了松花粉多糖及其微囊对REV感染所造成的免疫抑制鸡具有免疫增强功能,为松花粉多糖及其微囊开发为免疫增强剂提供了理论依据。