低氧对胃癌细胞增殖及LINE-1核酸内切酶变异体GCRG213表达影响的初步研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:summerquaner
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研究背景:低氧是实体肿瘤发展过程中的普遍特征。胃癌是胃黏膜上皮细胞变异产生的一种发病率及死亡率均较高的恶性肿瘤,其发生发展涉及多基因的改变,低氧环境显著影响胃癌细胞的生物学特性。胃癌相关基因213(gastric cancerrelated gene213,GCRG213)是本实验室发现的在胃癌组织中高表达的基因序列,属于人长散在核元件(long interspersed nuclear element-1,LINE-1)家族成员,是LINE-1核酸内切酶(LINE-1endonuclesse,L1-EN)的变异体。前期研究提示GCRG213表达可能与胃癌细胞增殖相关。目的:研究不同低氧条件下胃癌细胞增殖改变以及对GCRG213和L1-EN表达的影响。方法:将人正常胃粘膜细胞GES-1与胃癌细胞BGC-823分别在20%O2、3%O2及0.3%O2浓度下进行培养, MTT比色法检测细胞存活率的变化, RT-PCR及Western blotting检测细胞的GCRG213mRNA和蛋白表达变化;RT-PCR检测细胞中L1-EN mRNA表达变化;应用衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence-associated β-Galactosidase,SA-β-gal)染色检测细胞衰老情况。结果:(1)与20%O2浓度相比,GES-1细胞与BGC-823细胞在3%O2浓度条件下培养24h及48h后增殖升高(P<0.01),细胞增殖升高幅度GES-1细胞大于BGC-823细胞增殖(P<0.05);在0.3%O2浓度条件下培养24h及48h后,GES-1细胞与BGC-823细胞增殖降低(P<0.05),细胞增殖降低幅度BGC-823细胞大于GES-1细胞(P<0.05);(2)在20%O2浓度条件下,BGC-823细胞的GCRG213mRNA及蛋白表达水平均高于GES-1细胞(P<0.05);(3)与20%O2浓度相比,在3%O2条件下培养48h后,GES-1细胞与BGC-823细胞中的GCRG213mRNA及其蛋白表达均增高(P<0.05),且BGC-823细胞中GCRG213表达的增高幅度大于GES-1细胞(P<0.05);(4)在0.3%O2条件下培养48h后,与20%O2培养条件相比,不论GES-1细胞还是BGC-823细胞中的GCRG213mRNA及其蛋白表达均无显著性差异,但两种细胞中L1-ENmRNA的表达则显著增高(P<0.05),且BGC-823细胞中L1-EN mRNA表达的增高幅度大于GES-1细胞(P<0.05);(5)GES-1细胞与BGC-823细胞在3%O2条件下培养48h后,其GCRG213mRNA及蛋白表达高于在0.3%O2条件下培养的细胞(P<0.05);(6)在0.3%O2条件下培养48h后,BGC-823细胞SA-β-Gal染色的阳性细胞数显著高于常氧对照组。结论:低氧环境可以影响胃癌细胞增殖;3%O2浓度的低氧可以引起胃癌细胞中GCRG213的表达升高;0.3%O2浓度下胃癌细胞的L1-EN表达升高,同时胃癌细胞BGC-823衰老增加,增殖下降。
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