目的研究纺锤体动粒相关复合体-1(Spindle and kinetochore associated complex-1,SKA1)在葡萄膜黑色素瘤(Uveal Melanoma,UM)组织中的表达,以及在UM发生发展过程中的作用及分子机制,为临床以SKA1为靶点UM精准治疗提供科学依据。方法1、以免疫组化法检测20例福尔马林固定-石蜡包埋UM组织中SKA1的表达水平,并分析SKA1与临床病理特征及生存预后的关系;同时,利用生物信息学方法,分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中UM病例组织中SKA1表达、与预后及临床病理特征的关系,佐证课题组研究结果的可靠性。2、采用实时荧光定量PCR(Quantitive Real Time PCR,q RT-PCR)检测A-375、MUM-2B和MUM-2C黑色素瘤细胞株中SKA1的表达,筛选SKA1高表达细胞株作为工具细胞,再以SKA1干扰慢病毒感染工具细胞,以无义序列作为阴性对照(sh Ctrl),q RT-PCR检测各处理组细胞中SKA1表达,筛选有效干扰序列,用于后续细胞表型研究。3、以SKA1干扰慢病毒感染工具细胞,以无义序列作为阴性对照,再采用MTT法、流式细胞技术及Caspase3/7法检测增殖、凋亡相关蛋白,研究SKA1敲减后,细胞增殖、凋亡生物学活性的变化,明确SKA1在UM发生发展过程中的具体作用。4、利用TCGA数据库中UM病例,根据SKA1表达中位值分为高、低表达两组,再采用基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA)的方法,分析SKA1调控UM发生发展的信号通路。结果1、SKA1在UM肿瘤组织、癌旁组织的表达无统计学差异(P>0.05)。TCGA生信分析结果显示,SKA1高表达的患者,总生存率(Overall survival,OS)显著下降(P=0.021,HR=2.55,95%CI:0.92-7.05)。2、SKA1在A-375、MUM-2B和MUM-2C黑色素瘤细胞株中表达丰度均高。3、与阴性对照组相比,sh SKA1-1、sh SKA1-2、sh SKA1-3处理组的敲减效率分别为78.86%、62.71%、57.83%。3、以sh SKA1-1干扰慢病毒感染MUM-2B工具细胞,与sh Ctrl组相比,sh SKA1-1干扰组490 nm OD值显著降低(P<0.05),sh SKA1-1干扰组凋亡细胞比例显著升高(P<0.05),sh SKA1-1干扰组荧光强度显著升高(P<0.05)。4、GSEA分析显示,SKA1高表达,与细胞周期、减数分裂、损伤修复、核苷酸代谢、DNA复制及肿瘤发生相关的信号通路有关。结论实验研究及生信分析结果显示,SKA1在UM组织中呈高表达,其高表达是影响UM预后的不良因素;SKA1可能通过促进细胞周期转化,抑制凋亡,进而促进UM发生发展。