TMT质谱技术分析螨虫诱发的儿童过敏结膜炎泪液蛋白组学的差异表达

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:songyinming
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目的:常年性过敏性结膜炎(PAC)是儿童最常见的眼部过敏疾病,严重损害了患儿的生活质量。这项研究旨在使用定量蛋白质组学技术串联质谱标签法(TMT)分析人泪液中的多肽谱,以阐明儿童PAC与健康受试者的蛋白质差异表达。探索PAC患者泪液中潜在生物标志物。方法:筛选螨虫诱导的PAC并通过问卷调查及客观检查评估泪液质量。使用Schirmer泪液试纸收集健康受试者和PAC儿童泪液样本。经过SDT裂解法提取蛋白质;FASP酶解法进行肽段酶解,TMT试剂标记。LC-MS/MS分析是Q-Exactive质谱仪上完成的。嵌入到Proteome Discoverer 1.4中的MASCOT引擎搜索MS/MS光谱。此外,使用QExactive HP对目标蛋白进行PRM分析,Skyline 3.7.0用于数据分析。结果:儿童PAC会导致泪膜功能障碍,泪膜破裂时间、角膜荧光素染色、泪河高度与对照组比较有显著差异;泪液蛋白组学鉴定到肽段的谱图数量为24265,鉴定到的肽段总数为9140,鉴定到唯一肽段数为8011,鉴定到的蛋白质总数为1697;以倍数变化大于1.2倍且P<0.05的标准筛查差异表达蛋白,两个比较组总的差异表达蛋白数目为284个,其中上调蛋白155个,下调蛋白总数129个。通过PRM对5个目标蛋白的12个目标肽进行了绝对定量分析。与对照组相比,PAC患者的泪液水平EPO(P=0.01),ECP(P=0.01),MBP(P=0.02)和LEG7(P<0.01)有显著差异。结论:使用TMT进行蛋白质组学分析是筛选泪液中大量蛋白质的强大工具。嗜酸性粒细胞在过敏性炎症中起病理生理作用。嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、嗜酸性粒细胞过氧化物酶、嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白、半乳凝素7可能是PAC潜在的生物标志物。此外,揭示半乳凝-7和载脂蛋白A-II可能参与了PAC的发病机制,从而为研究眼部过敏性疾病的临床医生和研究人员提供了重要的诊断信息。
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