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牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea, BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)引起的给奶牛业造成严重损失的传染性疾病。本研究的目的是确定北京地区牛场牛病毒性腹泻的流行病学特点及筛查持续性感染牛。2010-2013年间,本研究调查了北京郊区的25个牛场,采集和检测样品4,327份(4,320份血清样品和7份组织样品),应用间接ELISA方法对随机选取的1,000份样本进行了抗体检测,应用抗原捕获ELISA和RT-PCR方法对全部样本的病毒抗原进行了检测,结果检测出18份抗原阳性样品,其中12份样本确定来自于持续性感染牛。随机选取的1,000份血清样本抗体检测结果表明有934份呈现阳性。应用细胞培养法对18份阳性样本进行病毒分离,细胞培养结果显示所有毒株的生物型都为非致细胞病变型(noncytopathic, NCP)型,随后本研究对病毒的5’端非编码区(untranslated region, UTR)和Npro进行了PCR扩增和克隆测序,参考国内外报道毒株,依据5’-UTR构建了系统进化树,结果显示18株病毒依次为BVDV-lm(6株)、1a(5株)、1d(3株)、1q(3株)和lb(1株)。分子流行病学调查结果说明北京地区牛病毒性腹泻病毒的基因多态性较高,并且持续性感染牛是造成广泛流行的重要原因。先天性免疫反应是机体抵抗病毒感染的第一道防线,而Ⅰ型干扰素(interferon, IFN)是先天性免疫系统的核心。本研究以持续性感染牛的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)为研究对象,探讨持续性感染牛在适应性免疫反应缺失的情况下先天性免疫的功能。从受体、转录因子和效应分子三个角度,具体检测包括模式识别受体中的人视黄酸诱导基因1样受体(RIG-I-like receptor, RLR)和Toll样受体(Toll-like receptor, TLR),干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3, IRF-3)与IRF-7,以及干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15, ISG-15)和黏病毒抵抗蛋白1(myxovirus (influenza virus) resistance 1, Mxl)的mRNA或蛋白表达变化。结果显示持续性感染牛在与健康牛相比,TLR-7, IFN-α和IFN-β的mRNA表达量显著降低,IRF-3与IRF-7的蛋白表达量也出现降低,与之相对的是,I型干扰素效应分子ISG-15及Mxl mRNA表达量显著升高。本研究的研究结果暗示：一方面,不止IRF-3的降低在BVDV逃避I型干扰素反应的过程中发生作用,IRF-7的表达也受到病毒的影响。此外,IRF-7的上游受体TLR-7转录也受到抑制,这说明TLR-7-IRF-7信号通路在病毒抑制Ⅰ型干扰素产生过程中起重要作用；另一方面,ISG-15和Mxl的转录水平升高表明-血液中有外源性干扰素产生,这些外源性干扰素可能为PBMCs抵抗其它病原的感染起着重要作用。总之,我们的研究表明TLR-7-IRF-7信号通路受到影响可能是产生持续性感染牛的一个重要原因。在本研究中,我们评价了中药连翘的有效成分连翘酯苷A(Forsythoside A, FTA)对受BVDV感染牛PBMCs的4-1BB和OX40共刺激分子信号的影响。本研究对各组中CD28, CTLA-4,4-1BB,4-1BBL和OX40的转录水平进行了检测,另外也利用Western blot对4-1BB在病毒感染后不同时间点的表达情况也进行了研究。随后,我们测定了OX40和4-1BB的接头分子肿瘤坏死因子受体相关因子1(tumor necrosis factors receptor associated factor 1, TRAF-1)与TRAF-2以及下游凋亡相关分子Bcl-xL与Bim在各组中的转录水平变化。结果表明FTA不仅能够促进OX40,4-1BB及4-1BBL的转录水平,还能上调其接头分子TRAF-2及抗凋亡基因Bcl-xL的转录水平。除此之外,本研究还检测了PBMCs在不同组及不同时间点IFN-γ与IgG2a的分泌情况。结果表明BVDV的感染会诱导过量的IFN-γ产生,而FTA的加入能够抑制这种过度的反应,同时FTA不会抑制抗体的型别转换。总之,本部分研究的结果表明FTA具有调节受BVDV感染牛PBMCs共刺激信号通路的功能,FTA具有潜在的免疫反应调节作用。