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目的:在微团培养条件下探讨不同离心力对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响与作用。方法:取6周龄的SD大鼠,在无菌条件下分离出股骨和胫骨并抽取骨髓,使用密度梯度离心法提取原代BMSCs,并经过反复换液和传代得到纯化的BMSCs,使用流式细胞仪测出CD29、CD90和CD45的含量,鉴定细胞的纯度。取第6代BMSCs采用微团方式进行立体培养,在培养过程中更换以TGF-β1,ITS为主要成分的诱导培养基并根据离心力强度将细胞分为4组:无应力对照组、100g应力组、200g应力组和300g应力组。诱导培养28天后,对细胞团块进行鉴定和比较。鉴定指标主要为大体观察细胞团块的形态、光泽度等;台盼蓝染色测定细胞活度;甲苯胺蓝染色测定蛋白聚糖的合成和II型胶原免疫组化检测II型胶原含量。结果:1、BMSCs原代细胞早期接种时,细胞呈类圆形,48小时后少许细胞贴壁,并逐渐延伸成长梭性。约7日后即可见明显的集落形成,与周围的集落渐渐的融合,2周后,细胞基本融合达90%,排列紧密而有序,至第5代时细胞形态更加规矩,单个细胞已成一致的狭长梭形,排列紧密有序,集落中心呈旋涡状生长。2、BMSCs流式细胞仪检测结果: CD29表达率为97.36%,CD90表达率为99.61%,均为强阳性反应;CD45表达率为0.44%为阴性反应。说明此BMSCs细胞样本纯度很高,符合本实验要求。3、BMSCs经28天诱导后,于离心管底部肉眼可见的银白色小质块,,球形,略有光泽,用镊子夹之韧性较差,各分组间细胞团块的大小,色泽无明显差异。4、BMSCs经28天诱导后台盼蓝染色结果:无应力,100g,200g三组之间细胞活力无明显差异,而300g应力组的细胞活力则较前三组明显降低,具有统计学意义(p<0.05)。5、BMSCs经28天诱导后甲苯胺蓝染色:200g应力组胞外基质有较明显的紫红色异染,100g组和300g组异染性较差,无应力对照组最差。6、BMSCs经28天诱导后Ⅱ型胶原免疫组化结果:200g应力组呈强阳性反应,可见大量棕黄色的软骨细胞特异性基质,100g及300g组可见少量淡棕黄色的软骨细胞特异性基质,但较200g组明显减少,无应力组含量最少。结论:100g应力强度过小,不足以使BMSCs充分的转化。300g的应力强度过大,超出了BMSCs所能承受的最大范围,反而对细胞造成了伤害,200g的离心力较适宜BMSCs向软骨细胞定向分化。