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c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kinase, JNK)家族是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)超家族的重要成员之一,在多种胞外刺激下,JNK通过经典的MAPK蛋白序列磷酸化模式被活化,即：MAPK激酶激酶(MAP3K或MEKK)磷酸化并活化MAPK激酶(MAP2K或MKK),进而MAP2K磷酸化并活化MAPK。JNK上游有两个MAP2K, MKK4和MKK7。MKK4不仅能够激活JNK,还可以激活p38,而MKK7只特异地激活JNK。我们以往的工作提示,靶向MKK7可实现对JNK途径特异、有效的调节。有报道表明,MKK7可发生泛素化修饰而降解,但其它“泛素样蛋白”是否可通过修饰MKK7调节JNK活性还未见报道。在“泛素样蛋白”之中,NEDD8(neural precursor cell-expressed developmentally downregulated8)的结构与泛素最为接近,它与泛素具有80%的相似性,NEDD8特异地与底物共价结合的过程被称为neddylation,其发生机制与泛素化相似,需要El、E2、E3等酶介导的一系列酶促反应,其中活化酶El是由APPBP1(amyloid beta precursor protein binding protein1)和UBA3(ubiquitin-like modifier activating enzyme3)组成的异源二聚体。Neddylation可以增强泛素连接酶活性,促进细胞周期进程。研究表明neddylation在肿瘤的发生发展中发挥重要促进作用,然而其分子机制尚不清楚。本研究以乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7为主要研究模型,观测了MKK7的neddylation情况,敲低UBA3/NEDD8对MAPK通路主要成分磷酸化的影响、对MKK7与JNK结合的影响、对MKK7激酶活性的影响,分析了MKK7和JNK在乳腺癌细胞恶性生长中发挥的作用,探讨了MKK7neddylation的可能生物学意义和E3,实验结果表明,在乳腺癌细胞中MKK7存在neddylation; SUMOylation E3RanBP2(Ran-binding protein2)可能在MKK7neddylation中发挥重要作用；neddylation不影响MKK7被上游激酶磷酸化,但抑制MKK7的激酶活性,进而导致JNK磷酸化水平下降。进一步的研究发现,结肠癌细胞中MKK7发挥促瘤作用,不存在neddylation,提示MKK7neddylation的发生具有细胞类型特异性,可能取决于MKK7是发挥抑瘤作用还是促瘤作用。由于乳腺癌细胞中MKK7活性抑制恶性生长,我们的结果提示neddylation促进乳腺癌细胞恶性生长的部分机制为修饰MKK7进而抑制MKK7活性。图24幅,表0个,文献52篇