土霉素作为饲料添加剂越来越被广泛用于畜禽养殖业中，残留于鸡粪中的土霉素若未经有效处理而随施肥进入农田环境，会对农业生态环境安全产生潜在的危险。本文针对土霉素在畜禽粪便中的残留问题，优化了鸡粪堆肥中土霉素的测定方法，采用实时在线堆肥反应器，研究了不同浓度土霉素处理对鸡粪堆肥理化性质的影响，碳氮比、含水率、调理剂等对鸡粪堆肥中土霉素降解和理化性质以及细菌真菌多样性的影响，结果如下：土霉素测定方法：利用Mcllvaine-EDTA缓冲液提取，Water Oasis HLB固相萃取小柱净化提取：3.0mL的5%甲醇水淋洗液冲洗柱子，3mL(0.01mol·L^-1的草酸甲醇)洗脱液洗脱；采用流动相0.01mol·L^-1草酸：乙腈：甲醇比例为85:10:5（V:V:V）；355nm的检测波长。优化后的方法得出土霉素的加标回收率介于77.19%⁸4.26%之间，检测限为0.045mg·kg^-1。该方法简便快捷和灵敏准确，适合鸡粪堆肥样品土霉素的快速定量检测。不同浓度土霉素处理：以鸡粪和小麦秸秆为堆肥原料表明，土霉素浓度越高，在堆肥中去除率越低；高浓度的土霉素处理降低了鸡粪堆肥堆体温度升高的速率，缩短了堆肥高温期的时间；土霉素初始浓度>75mg·kg^-1可以显著降低鸡粪堆肥产品的腐熟度，主要表现为NH+4-N/NO-3-N>0.5，GI<80%；堆体高温期的细菌主要是芽孢杆菌（bacillus）属和嗜热菌（thermophilic）；真菌主要是酵母菌和曲霉菌属，与Cryptococcus albidus（隐球菌）相近的微生物对土霉素较为敏感。初始含水率处理：在添加土霉素为100mg·kg^-1的基础上，初始含水率分别为45%、55%和65%的3组处理，结果表明高含水率处理的土霉素降解率高于低含水率处理；含水率越高，温度升高的速率就越大；堆肥的初始含水率为55%⁶5%之间有利于土霉素的降解和堆肥浸提液生物毒性的降低。碳氮比处理：在添加土霉素为100mg·kg^-1和合适含水率的基础上，碳氮比为T1（21.6）、T2（25.5）、T3（32.8）的3组处理。结果表明高C/N处理的土霉素降解优于低C/N处理；T2和T3处理的平均温度较高；高C/N处理在一定程度上可以显著降低堆肥浸提液的生物毒性，堆肥结束时，C/N处理为25.5和32.8的GI＞80%。调理剂处理：以生物炭、玉米秸秆、青草和小麦秸秆为调理剂，结果表明，除生物炭处理外其他处理组土霉素去除效果明显，堆肥结束时，土霉素均降至30mg·kg^-1以下，小麦秸秆的堆肥处理去除率高达80%以上；生物炭处理堆体温度始终维持在35℃以下；堆肥结束时，生物炭、玉米秸秆、青草和小麦秸秆的GI分别为42.36%、92.16%、85.22%和90.45%；堆肥的不同时期，生物炭处理的细菌多样性始终高于其他处理，各组处理的真菌群落结构多样性较为相近。综合各种因素得出，高含水率（55%⁶5%）和高碳氮比（25.5³2.8）的堆肥条件，以玉米秸秆和小麦秸秆作为调理剂的鸡粪堆肥更有利于堆体中土霉素的降解和堆肥的腐熟。