论文部分内容阅读
目的:在以腺病毒重组载体Ad-CMV-hTrail作为对照基础上,研究Ad-Egr-hTrail的辐射诱导特性及其联合放射线对胶质瘤细胞的杀伤作用。
方法:将Ad-Egr-hTrail和Ad-CMV-hTrail分别在AE25crma细胞中进行大量扩增,将扩增鉴定成功的重组腺病毒以MOI=100感染U251细胞,病毒感染48h后给予γ射线照射。实验分6组:空白对照组(A组),Ad-Egr-hTrail+0Gy组(B组),Ad-CMV-hTrail+0Gy组(C组),单纯12Gy组(D组),Ad-Egr-hTrail+12Gy组(E组),Ad-CMV-hTrail+12Gy组(F组)。real-time quanitative-PCR法测定不同组别肿瘤细胞Trail mRNA表达水平;Western Blot检测Trail基因蛋白的表达水平;MTS法测定肿瘤细胞的抑制率。
结果
1.B、C、D、E、F组的Trail mRNA相对表达水平分别为:6.23,42.68,1.43,48.84,56.72;Ad-Egr-hTrail+12Gy组Trail mRNA表达水平是单纯Ad-Egr-hTrail组7.84倍,而Ad-CMV-hTrail+12Gy组Trail mRNA表达水平是单纯Ad-CMV-hTrail组1.33倍。
2.Ad-Egr-hTrail+12Gy组Trail蛋白较单纯Ad-Egr-hTrail组表达明显增加,而Ad-CMV-hTrail+12Gy组Trail蛋白表达与单纯Ad-CMV-hTrail组相比无明显变化。
3.腺病毒重组载体联合放射线对脑胶质瘤细胞杀伤作用:(1)B、C、D、E、F组的抑制率分别为:5.49%、24.61%、29.55%、40.77%、45.15%,B组与A组相比无明显的差异(P>0.05),其余各实验组与对照组相比均有显著性差异(P<0.01);(2)两种腺病毒重组载体单独使用时,C组的抑制率明显高于B组(P<0.01),两者联合放疗时,抑制率均明显提高(P<0.01),E组是B组的7.43倍,F组是C组的1.84倍;(3)与D组相比,E组、F组的抑制率明显提高(P<0.01),E组的放疗增敏比为1.38倍,F组的放疗增敏比为1.53倍。
结论
1.腺病毒重组载体Ad-Egr-hTrail具有较强辐射诱导特性;
2.腺病毒重组载体Ad-CMV-hTrail不具有辐射诱导特性;
3.Trail基因可能具有辐射增敏作用;
4.携带Trail基因腺病毒重组载体联合放射治疗优于单纯基因治疗或单纯放射治疗。