猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）是引起猪地方流行性肺炎（Swine EnzooticPneumoniae，EP）的病原。传统的Mhp定量检测方法主要有颜色变化单位（color change unit，CCU）检测、菌落形成单位（colony forming unit，CFU）检测、显微镜检测计数以及聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）等方法。上述方法费时费力，实验过程中容易污染，常引起鉴定、计数失误，导致试验结果具有波动性。近年来，国内外开始利用荧光定量PCR技术检测支原体并对支原体进行精确定量的研究，但只做到Mhp的定性检测，仍然没有解决Mhp定量检测的难题。本实验以GenBank公布的Mhp 232株（ACCESSION No．NC₀06360）p110基因、p97基因和p46基因序列作为靶序列，参考J株（ATCC 25934，ACCESSION No．NC₀07295）、7448株（ACCESSION No．NC 007332）p76基因、p97基因和p46基因序列，设计合成了多对特异性引物，通过对荧光定量PCR扩增曲线、标准曲线、熔解曲线的分析，筛选出符合Mhp荧光定量PCR定量检测要求的引物p110realF／R；构建了含有Mhp p110基因的标准质粒pEASY-T1-p110，并建立了以p110（p76）基因序列作为靶序列的Mhp SBYR GREEN荧光定量PCR检测方法。该方法准确、快速、灵敏、无污染，具有良好的特异性、重复性，能够检测到10拷贝／μL的标准质粒，可用于Mhp培养物和疫苗半成品的快速定量检测。