安脑平冲汤对大鼠脑出血后神经保护机制的研究

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【目的】探讨安脑平冲汤对脑出血大鼠PKA、pCREB、BDNF蛋白表达的影响,探究其对脑出血大鼠神经保护的作用机制。【方法】参照随机数字表法将SD大鼠分为以下组别:正常组、假手术组、模型组、安脑平冲片低剂量组、安脑平冲片高剂量组、吡拉西坦组,自体血尾状核注入法制作脑出血模型,每组下设6h、3d、7d、14d 4个亚组,术后各组给取相应药物,1次/d,正常组、假手术组、模型组均给取同等剂量蒸馏水,然后在相应时间点断头取脑组织,评价各组大鼠各时间点神经功能缺损评分、脑含水量、HE染色检测观察大鼠脑组织形态改变、Western blot法检测脑组织中PKA、pCREB、BDNF蛋白的表达。【结果】1.神经功能缺损评分:模型组神经功能缺损评分均高于正常组、假手术组(P<0.05);与正常组比较,假手术组神经功能缺损评分无明显变化(P>0.05);与模型组比较,中药低量组、中药高剂量组、吡拉西坦组脑出血第3d、7d、14d降低(P<0.05),中药高剂量组与中药低量组、吡拉西坦组比较,脑出血后第7天、14天降低(P<0.05)。2.脑含水量:模型组各时间点的脑组织含水量均高于正常组、假手术组(P<0.05),与正常组比较,假手术组脑组织含水量无明显改变(P>0.05);与模型组比较,中药低量组、吡拉西坦组脑出血第3d、7d、14d降低(P<0.05),中药高剂量组各时间点均降低(P<0.05),中药高剂量组与中药低量组、吡拉西坦组比较,脑出血后第7d、14d脑组织含水量降低(P<0.05)。3.HE染色:显微镜镜下观察:正常组、假手术组神经细胞密集,排列整齐,神经元胞浆丰富,淡染,胞核居中,核仁清楚,胞浆无红染,细胞周围间隙致密无水肿。模型组:可见细胞坏死,坏死细胞主要表现为核固缩、空泡形成;细胞明显水肿,胶质细胞增多,以及神经元减少、变性。低、高剂量组和西药组6h可见不同程度的细胞水肿、神经纤维溃变及炎性细胞浸润,出现变性细胞及坏死细胞,随着给药时间的延长,水肿程度及炎症反应逐渐降低,高剂量组第3天可见细胞少量轻度水肿,炎症细胞减少,西药组和低剂量组效果不及高剂量组明显。4.Western Blot检测:(1)PKA:正常组和假手术组各时间点PKA的表达无明显变化;与正常组、假手术组比较,模型组大鼠在同一时间点PKA的表达升高,7d达到高峰;与模型组比较,中药低剂量组、吡拉西坦组第7d、14d下降PKA的表达(P<0.05),中药高剂量组第3d已开始明显下降(P<0.05);中药高剂量组与中药低剂量组、吡拉西坦组比较,中药高剂量组第3d下调PKA的表达(P<0.05)。(2)pCREB:正常组和假手术组各时间点pCREB的表达无明显变化;与正常组、假手术组比较,模型组大鼠同一时间点pCREB的表达增高,第7d明显增高(P<0.05);与模型组比较,中药低剂量组及吡拉西坦组各个时间点pCREB的表达增加,以7d、14d明显增加(P<0.05),中药高剂量组第3d明显增加(P<0.05);与中药高剂量组比较,中药低剂量组与吡拉西坦组第7d、14d表达降低(P<0.05)。(3)BDNF:正常组和假手术组各时间点BDNF的表达无明显变化;与正常组、假手术组比较,模型组大鼠同一时间点BDNF表达增高,第7d明显增高(P<0.05);与模型组比较,中药低剂量组、中药高剂量组及吡拉西坦组各个时间点BDNF的表达增加;与中药高剂量组比较,中药低剂量组及吡拉西坦组第7d、14d表达降低(P<0.05)。【结论】1.安脑平冲汤可改善脑出血大鼠神经功能缺失评分,减轻脑水肿,发挥脑神经保护的作用2.可能的机制:抑制cAMP/PKA信号通路PKA的表达,下调脑组织中AQP4的表达;促进CREB的磷酸化,诱导BDNF的表达从而发挥脑神经保护的作用。3.安脑平冲汤在治疗大鼠脑出血作用方面具有一定量效关系。
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