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随着全球气候变暖,高温已经成为影响植物生长、发育、产量及地理分布的重要环境因素之一。高温胁迫会引起植物一系列的生理生化反应,包括活性氧的积累,细胞膜脂过氧化程度的增加,细胞失水,光合作用的抑制,酶活性的丧失等。番茄作为起源于热带的喜温蔬菜作物,对高温非常敏感,持续的高温会影响番茄的产量和品质,造成严重的经济损失。因此,研究番茄响应高温胁迫的生理和分子机制具有重要的科学意义和实践价值。锌金属蛋白酶是一种种类繁多、功能复杂的蛋白酶类,在植物的生长发育和逆境响应中具有重要的作用。在拟南芥中发现3个EGY锌金属蛋白酶,之前的研究主要集中在EGY1基因上,对于EGY2的功能研究较少。本研究从番茄基因组中分离得到SlEGY2基因,并以转反义SlEGY2番茄为材料,分析了抑制SlEGY2基因对于番茄生长发育及高温胁迫抗性的影响。主要研究结果如下:(1)根据NCBI上查到的SlEGY2基因序列(GenBank序列号XM010323653)设计特异引物,以番茄叶片cDNA为模版,利用PCR反应获得SlEGY2基因的全长cDNA。该基因全长1524bp,开放阅读框1335bp,编码444个氨基酸,预测等电点为6.19,蛋白分子量为48.56kDa,该基因位于4号染色体上。(2)构建SlEGY2-GFP的融合载体,瞬转烟草,利用激光共聚焦显微镜进行观察,发现SlEGY2蛋白定位于叶绿体。利用qRT-PCR及GUS染色对SlEGY2基因在番茄中的表达模式分析发现,SlEGY2基因在叶和花中的表达量最高,同时SlEGY2基因受高温、PEG、ABA和MeJA胁迫处理的诱导表达。(3)构建了SlEGY2抑制表达载体,利用农杆菌介导的叶盘转化法转化番茄,获得了转反义基因的番茄,并通过荧光定量PCR对转基因植株进行筛选,最终确定A1、A3、A33三个转反义基因番茄株系进行了后续实验。(4)高温胁迫处理后,WT与反义番茄植株均出现不同程度的萎蔫,但是反义番茄植株萎蔫的程度更严重,同时反义番茄植株的H2O2和O2?-的含量较WT明显增加,REC和MDA水平也明显高于WT番茄,说明反义番茄细胞膜的受伤害程度较重,抑制SlEGY2基因降低了番茄的高温抗性。高温胁迫后,番茄植株的Fv/Fm、Pn和D1蛋白的含量均降低,但是反义番茄植株下降程度比WT大,说明抑制SlEGY2基因加重了转基因番茄在高温处理下的光抑制程度。(5)在正常生长条件下,反义番茄植株的幼苗较WT植株矮;将反义株系的种子和WT的种子种在MS培养基上并置于暗处生长一周,发现WT植株与反义植株子叶都没有展开,均出现黄化现象和顶端弯钩现象,并且反义株系顶端弯钩的弯曲程度比WT严重;利用气相色谱检测了反义植株和WT植株中的乙烯含量,发现反义株系乙烯释放量明显多于WT植株;但是对于番茄成苗,反义株系与WT株系在表型上无明显差别。