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口腔鳞癌是最常见的口腔癌之一,其发病率高,生存率低,严重危害人类健康。口腔鳞癌是多基因变化的结果,抑癌基因的失活、缺失与肿瘤的发生密切相关,因而基因诊断和基因治疗日益得到人们重视。PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten)基因是1997年发现的一种新的肿瘤抑制基因,定位于人染色体10 q23.3,是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,它的异常表达见于各种恶性肿瘤。本研究应用免疫组化技术S-P法和Western-blot对10例正常口腔粘膜、10例上皮单纯增生、15例上皮异常增生和32例口腔鳞癌组织中PTEN的蛋白表达情况进行检测,并观察该基因表达情况与患者年龄、性别及组织分化程度的关系;采用基因工程方法获得的工程菌(带有含PTEN基因的质粒pcDNA-PTEN)及含有pcDNA3.1(+)空载体质粒的菌种接种于含相应抗性的液体培养基中过夜培养。采用碱裂解法提取质粒,经限制核酸内切酶酶解分析和PCR扩增鉴定后,用超纯质粒提取试剂盒提取无菌质粒,分别将PTEN的真核表达载体和空载体转染人舌鳞癌(Tca8113)细胞系,经G418药物筛选一周,未转质粒的对照组细胞全部死亡,转入质粒的细胞系中含有阳性细胞克隆,继续培养至一定量后,分别从mRNA水平和蛋白质水平检测到PTEN基因已成功转入Tca8113细胞系中并能在其中表达,观察转染前后细胞的生长情况对其进行细胞计数,并通过流式细胞仪检测PTEN基因转染后对细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果:正常口腔粘膜和上皮单纯增生组织中PTEN蛋白全部<WP=44>阳性表达;上皮异常增生组织中PTEN蛋白阳性表达率为93.3%;OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率为71.9%,其中高、中、低分化OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为85.7%、75%和33.3%。PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与患者的性别、年龄无明显相关性,但与组织分化程度明显相关(P<0.05)。PCR和酶切鉴定结果表明构建的真核表达质粒pcDNA-PTEN正确可用于基因转染实验;细胞生长曲线及流式细胞仪检测显示转染PTEN基因后对肿瘤细胞生长有一定的抑制作用,并且促进细胞凋亡,细胞周期从G1期到S期发生抑制。结论:抑癌基因PTEN在口腔鳞癌发生发展过程中的表达呈进行性下调或缺失,在上皮异常增生组织中PTEN蛋白的阳性表达率较高,低分化鳞癌中PTEN蛋白的阴性表达率较高,因而借助PTEN可帮助鉴定口腔鳞癌的分化程度;体外PTEN基因的转入可以明显地抑制人舌鳞癌(Tca8113)细胞的生长,并促进细胞的凋亡,因而PTEN可能在口腔癌的基因诊断和基因治疗上发挥一定地作用。