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为完善海水养殖病害的防御监测机制，通过研究温度、盐度和pH等环境因素对副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因表达的影响，推断不同环境因子影响下副溶血弧菌致病性的差异，以探讨环境因子与副溶血弧菌T3SS基因表达及致病性和环境适应性之间的关系，为水产品疾病的防治等研究奠定基础。同时使用宏基因组测序技术对大菱鲆养殖水体和病鱼腹水水体的细菌菌群多样性和相对丰度进行了研究，为大菱鲆养殖过程中的病害防治提供背景资料。 以副溶血弧菌ATCC17802和JA21作为实验菌株，设置不同培养温度和温度应激两种培养条件，以pvuA为内参基因，以副溶血弧菌T3SS1的 vcrD1、vopS、vopD1和T3SS2的vscC2β、vcrD2β、vopP2β为目的基因，运用荧光定量PCR技术检测T3SS相关基因在不同生长温度和温度应激条件下的表达，用ΔΔCt法计算基因表达差异。结果表明，副溶血弧菌ATCC17802的T3SS1基因在16℃表达量最高，T3SS2基因在25℃表达量最高；JA21的T3SS基因在25℃表达量最高。T3SS2能够破坏肠道组织，并且具有一定的细胞毒性，是发挥感染作用的重要毒力因子，由此暗示在25℃条件下，养殖环境中的副溶血弧菌对受感染宿主有较强的致病性。 2株副溶血弧菌从不同的培养温度转入到应激温度37℃后，T3SS1和T3SS2基因的表达量均被显著诱导，并表现出时间依赖性，呈现先升高后降低的趋势。这为进一步探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据。 采用RT-PCR的方法，检测了ATCC1702和JA21这2株副溶血弧菌的T3SS基因在不同盐度和pH条件下的表达差异。发现当盐度在2.5％～3.5%之间时，2株副溶血弧菌T3SS基因表达量最低，而0.5%、5%、8%等过低或过高盐度下T3SS表达量显著增高；2株副溶血弧菌的T3SS在pH为9的碱性环境下表达量显著升高，反应强烈；酸性环境能适度诱导T3SS2的表达量升高，却不足以诱导T3SS1的表达。 设计通过CRISPR/cas9系统构建副溶血弧菌Δhns-ATCC17802突变株，荧光定量PCR方法检测在环境因子刺激下Δhns突变株的T3SS1及exsA、exsD的表达情况，并以标准株ATCC17802为对照，研究H-NS是否可以响应环境因子的刺激，对T3SS1的表达做出调控。由于未能成功构建出hns缺失株，实验未获成功，初步分析与启动子的识别有关。计划下一步将从这些方面着手研究。 采用高通量测序技术评估了大菱鲆养殖水体和患病大菱鲆腹水水体样本的细菌群落的特征。结果表明，样品中的优势菌群为变形菌门Proteobacteria和拟杆菌门Bacteroidetes。属水平上的分类结果显示，患病大菱鲆养殖水体中的优势菌群是假交替单胞菌属Pseudoalteromonas，所占比例明显最高。4种水体样本的细菌菌群α-多样性存在明显差异，其中病鱼养殖池水的细菌多样性最高，进水水体的细菌多样性最低。