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CBL(calcineurin B-like proteins)是近年来发现的植物所特有的一类钙调磷酸酶B类蛋白,与其靶蛋白CIPK(CBL-interacting protein kinase)一起在植物应答胁迫信号转导过程中起重要作用。前期研究表明ZmCIPK8在玉米逆境胁迫响应中发挥着重要作用,探究它与CBLs的互作关系对于进一步研究ZmCIPK8响应逆境胁迫的分子机制具有重要意义。本研究采用生物信息学、酵母双杂交、RT-PCR及亚细胞定位等技术,初步筛选分析了可能与ZmCIPK8相互作用的的CBLs,主要结果如下: (1)通过与水稻和拟南芥中的CBL基因序列在NCBI上进行BLAST比对,筛选得到10个玉米CBL基因序列。进化树分析发现玉米的CBL分为3个类群,CBL4、CBL5、CBL8分为1个类群,CBL10单独为1类群,其余分为另外1个类群。蛋白结构位点分析发现10个CBL均含有3个EF-hand结构域,并且每个EF-hand手型结构域的大小完全一致,结构域之间的连接区域大小也是相同的情况,只有首尾两端的序列大小存在差异。CBL1、CBL9具有很高的同源性(99%),处于同一个进化分枝,并具有完全一致的EF-hand结构域,推测它们可能具有共同的靶蛋白。 (2)在酵母双杂交系统中,以PGBKT7-ZmCIPK8作为诱饵载体,从10个玉米CBL中筛选可以与ZmCIPK8互作的CBLs蛋白。结果发现含有PGADT7-CBL1、PGADT7-CBL4、PGADT7-CBL9质粒的3个转化组在四缺板有菌落生长,X-gal染色实验也发现相应的菌落可以在8h之内显蓝色。推测CBL1、CBL4、CBL9与ZmCIPK8之间可能存在相互作用。它们的基因登陆号分别为EU907931、EU973091、EU960527。 (3)为了进一步验证ZmCIPK8与CBL1、CBL4、CBL9在植物体内是否存在相互作用,我们进一步分析了玉米中这4个基因在干旱胁迫下的转录表达情况。ZmCIPK8基因在根与叶中的表达情况相似,都是在30 min时段表达量稍微升高,之后逐渐降低。CBL1、CBL4、CBL9基因在胁迫初期的表达量都是有所升高,然后逐渐降低,这为它们可能在植物体内的相互作用提供了依据。 (4)为了明确CBL1、CBL4、CBL9在亚细胞中的定位情况,构建了CBL1、CBL4、CBL9基因与eGFP的PS1300融合表达载体。使用农杆菌EH105做介导,通过瞬时表达技术侵染洋葱表皮细胞,共聚焦显微镜观察发现CBL1、CBL4、CBL9定位于细胞膜。