ZmCIPK8互作蛋白CBLs的筛选

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shaohuang321
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
CBL(calcineurin B-like proteins)是近年来发现的植物所特有的一类钙调磷酸酶B类蛋白,与其靶蛋白CIPK(CBL-interacting protein kinase)一起在植物应答胁迫信号转导过程中起重要作用。前期研究表明ZmCIPK8在玉米逆境胁迫响应中发挥着重要作用,探究它与CBLs的互作关系对于进一步研究ZmCIPK8响应逆境胁迫的分子机制具有重要意义。本研究采用生物信息学、酵母双杂交、RT-PCR及亚细胞定位等技术,初步筛选分析了可能与ZmCIPK8相互作用的的CBLs,主要结果如下:  (1)通过与水稻和拟南芥中的CBL基因序列在NCBI上进行BLAST比对,筛选得到10个玉米CBL基因序列。进化树分析发现玉米的CBL分为3个类群,CBL4、CBL5、CBL8分为1个类群,CBL10单独为1类群,其余分为另外1个类群。蛋白结构位点分析发现10个CBL均含有3个EF-hand结构域,并且每个EF-hand手型结构域的大小完全一致,结构域之间的连接区域大小也是相同的情况,只有首尾两端的序列大小存在差异。CBL1、CBL9具有很高的同源性(99%),处于同一个进化分枝,并具有完全一致的EF-hand结构域,推测它们可能具有共同的靶蛋白。  (2)在酵母双杂交系统中,以PGBKT7-ZmCIPK8作为诱饵载体,从10个玉米CBL中筛选可以与ZmCIPK8互作的CBLs蛋白。结果发现含有PGADT7-CBL1、PGADT7-CBL4、PGADT7-CBL9质粒的3个转化组在四缺板有菌落生长,X-gal染色实验也发现相应的菌落可以在8h之内显蓝色。推测CBL1、CBL4、CBL9与ZmCIPK8之间可能存在相互作用。它们的基因登陆号分别为EU907931、EU973091、EU960527。  (3)为了进一步验证ZmCIPK8与CBL1、CBL4、CBL9在植物体内是否存在相互作用,我们进一步分析了玉米中这4个基因在干旱胁迫下的转录表达情况。ZmCIPK8基因在根与叶中的表达情况相似,都是在30 min时段表达量稍微升高,之后逐渐降低。CBL1、CBL4、CBL9基因在胁迫初期的表达量都是有所升高,然后逐渐降低,这为它们可能在植物体内的相互作用提供了依据。  (4)为了明确CBL1、CBL4、CBL9在亚细胞中的定位情况,构建了CBL1、CBL4、CBL9基因与eGFP的PS1300融合表达载体。使用农杆菌EH105做介导,通过瞬时表达技术侵染洋葱表皮细胞,共聚焦显微镜观察发现CBL1、CBL4、CBL9定位于细胞膜。
其他文献
“她现在每天的工作安排得见缝插针,无论是教材讨论会,还是带骨干教师们到远郊支教带徒,都能见到刘老师.”刘莹的徒弟赵老师这样说道.rn刘莹,北京石油学院附属小学退休教师,1
  通过粘土、壤土和沙土共3 种类型土壤分别在不同的设计容重1.4 g/cm3、1.5 g/cm3、1.6g/cm3 时的土壤含水量~土壤水吸力变化关系试验,分析了各土壤在不同设计容重时土壤水
会议
  痕量灌溉是基于独特的双层结构的一种新型高效节水灌溉技术,克服了长期困扰滴灌的灌水器堵塞的技术难题,实现了真正稳定的地下水肥一体化,在节水效率、抗堵塞性能及远距离均
  为了研究参考作物需水量(ET0)对气象要素的敏感性,分析二者之间的关系,利用新乡地区1951-2003年逐日气象资料,由Penman-Manteith 公式计算ET0,采用敏感曲线和敏感系数方
会议
  为深入研究微润灌溉技术在现代农业工程中的应用,综述了微润灌溉技术的研究现状。微润灌溉技术的研究主要采用试验研究、理论分析及数值模拟的方法,本文总结了微润灌溉技术
  针对传统植株移植灌溉方式浪费水、劳动强度大、不利于植株根系生长的特点,设计了一种基于微润灌溉技术的植株移植灌溉用集雨式微型水库装置。简要介绍了该装置的工作原理
  以枣树为对象,引进微润灌溉技术产品,在宁夏干旱区建立试验区。开展枣树微润灌溉条件下,水分入渗过程及土壤水变化特征试验研究。试验结果表明:当保持2m 稳定水头,微润管
会议
  负压灌水器是负压灌溉系统中的关键部件,它的出流性能将直接影响系统的成败。通过正压试验和负压试验,初步研究了负压灌水器在不同条件下的出流性能。试验结果表明,负压灌水
  适宜的土壤水分是植物生长的有利条件,如何精确控制土壤水分一直是国内外研究的重点。对于家中无人看护的盆栽,水分的供应成为盆栽生存的限制因素。一种简易的负压灌溉装置
会议