环加氧酶-2（COX-2）及其产物前列腺素E₂（PGE₂）在细胞增殖中的作用一直受到人们的关注，在许多肿瘤组织中都有COX-2／PGE₂的高表达现象，但PGE₂影响肿瘤细胞生长的作用机理目前还不十分清楚。PGE₂是COX-2的主要产物，通过刺激诱导肿瘤血管增生，抑制局部免疫功能，调节多种信号传导途径而影响细胞的增殖，促进肿瘤细胞的生长。因此研究PGE₂的细胞内信号转导通路以及PGE₂影响肿瘤细胞生长的机制可为防治肿瘤提供重要的依据。本实验探讨PGE₂对胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP增殖的影响，并初步探讨了PGE₂促进胆管上皮癌细胞生长的机制，为进一步研究PGE₂影响肿瘤细胞生长的机制提供一定的基础。探讨前列腺素E₂（prostaglandin E₂，PGE₂）对胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP增殖的影响及其可能机制。1．细胞培养：HuCCT1和CCLP胆管上皮癌细胞分别培养于DMEM和RPMI-1640培养基中。2．细胞生长和活性测定（WST-1）实验检测PGE₂对胆管上皮癌细胞增殖的影响。3．Fluo-3／AM荧光负载胆管上皮癌细胞，激光扫描共聚焦显微镜检测外源PGE₂对细胞内钙离子浓度的影响。4．酶联免疫法测定胆管上皮癌细胞内环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）的浓度。5．PGE₂、forskolin和BAPTA-AM处理胆管上皮癌细胞，并制作细胞爬片，进行荧光免疫细胞化学实验，于荧光显微镜下观察p-CREB的表达和定位。6．PGE₂、forskolin和BAPTA-AM处理胆管上皮癌细胞，提取蛋白，Westem Blot检测胆管上皮癌细胞中p-CREB蛋白的表达情况。7．收集江苏省人民医院胆管癌6例，免疫组化法检测胆管癌组织中p-CREB蛋白的表达情况。1．细胞生长和活性测定（WST-1）实验显示1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L和20μmol／L PGE₂可促进胆管上皮癌细胞HuCCT1生长，肿瘤细胞生长率分别为105.36％、112.45％、120.73％和128.21％，CCLP细胞结果与此类似。2．10μmol／L PGE₂可引起HuCCT1细胞荧光值发生动态变化，荧光值平均增加约50％，表明PGE₂可增高HuCCT1细胞内钙离子浓度，CCLP细胞结果与此类似。3．PGE₂可增高HuCCT1细胞内cAMP浓度，0.1μmol／L、1μmol／L和10μmol／L PGE₂作用细胞时，细胞内cAMP浓度分别为183.94 pmol／L、189.01 pmol／L和202.12 pmol／L，CCLP细胞结果与此类似。4．荧光免疫细胞化学实验结果表明p-CREB定位于HuCCT1和CCLP肿瘤细胞核，PGE₂和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA-AM则抑制CREB蛋白的磷酸化。5．Westem Blot实验结果与荧光免疫细胞化学实验结果一致，PGE₂和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA-AM则抑制CREB蛋白的磷酸化。6．免疫组化实验结果表明，人胆管癌组织中有较强的p-CREB蛋白表达。胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP经PGE₂处理后可见细胞内Ca²⁺和cAMP浓度增高、CREB蛋白的磷酸化水平增高。表明PGE₂可能通过Ca²⁺、cAMP／p-CREB信号通路促进胆管上皮癌细胞生长。