高效液相色谱法和光谱法测定松花粉和龙葵中巯基化合物

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植物体中的谷胱甘肽(GSH)等含巯基的化合物不仅在植物自身生理中扮演重要作用,而且对其他生命提供类似的生物活性,如抗氧化,抗癌、提高免疫力等。但许多植物缺少这些含巯基化合物的含量报道,这可能与植物样品的前处理过程不当有关。目前植物样品中活性成分的测定,大多经过细胞破壁、提纯、衍生化等前处理步骤。而巯基化合物的巯基具有还原性,故在细胞破壁提取过程中很容易被胞外的环境所氧化变性,导致无法得到样品中准确的巯基化合物含量的信息。本研究利用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法,采用高效液相色谱法和光谱法测定了松花粉和龙葵中巯基化合物。第一章绪论综述了生物体中巯基化合物的生物学功能与测定方法,并提出了本文的选题思想和主要研究内容。第二章高效液相色谱法测定松花粉中GSH和Cys高效液相色谱法可以测定生物样品中各种巯基化合物。本文利用DTNB为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法,测定了松花粉中GSH和Cys的含量。松花粉中GSH和Cys的含量分别为0.5344μmol/g和0.4134μmol/g,回收率达101.14%和96.83%,其检测限分别为5.43μmol/L和4.96μmol/L。第三章光谱法测定松花粉中总巯基和GSH的含量衍生化试剂DTNB对GSH、Cys以及含半胱氨酸残基的蛋白质中的巯基无选择性,可以测定样品中总巯基的含量,而衍生化试剂OPA与巯基化合物中的GSH选择性作用生成荧光衍生化产物。本文采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法,利用DTNB衍生化UV-vis分光光度法和OPA衍生化荧光分光光度法测定了松花粉中总巯基和GSH的含量。松花粉中总巯基和GSH的含量分别为4.1500-4.4160μmol/g和0.5045-0.5181μmol/g,回收率达97.22%和96.44%,其检测限分别为2.2414μmol/L和0.1162μmol/L。第四章光谱法测定龙葵叶子中总巯基和GSH的含量衍生化试剂4-DPS类似于DTNB,可以测定小分子巯基和蛋白巯基等样品中总的巯基含量。利用4-DPS和OPA为衍生化试剂,分别采用UV-vis分光光度法和荧光分光光度法测定了龙葵叶子中总巯基和GSH的含量。龙葵叶子中总巯基和GSH含量分别为0.3668-0.3878μmol/g和0.1151-0.1273μmol/g,回收率达98.36%和101.78%,其检测限分别为0.8994μmol/L和0.1547μmol/L.
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