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本试验对影响绵羊卵母细胞体外成熟、孤雌激活以及体细胞核移植胚胎发育的一些因素进行了研究，以期建立比较稳定的绵羊体细胞核移植系统，为开展发育机理研究及提高绵羊克隆效率提供进一步的技术支持。本试验研究结果主要包括以下几个方面:
(1)采用抽吸法、切割法和综合法三种方法来收集绵羊卵母细胞。结果表明，使用切割法在每个卵巢收集到的COCs最多2.08枚/个卵巢，且成熟率显著高于抽吸法与综合法(61.4％vs51.5％vs56.4％，P＜0.05)。在绵羊卵母细胞的采卵方法中，切割法最为适合。
(2)在成熟液中分别添加0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml的EGF，结果表明添加10 ng/ml EGF组的COCs成熟率显著高于0 ng/ml和5 ng/ml组EGF的成熟率(78.8％vs68.1％，70.2％，P＜0.05)，但其成熟率与20 ng/ml EGF组差异不显著(78.8％vs79.8％，P＞0.05)，且比20 ng/ml EGF组的细胞成熟率低1％。本试验中添加20 ng/ml EGF，得到了较高的成熟率。
(3)在成熟液中分别添加10 ug/ml FSH+10 ug/ml LH和0.075 IU/ml HMG，结果表明添加10 ug/ml FSH+10 ug/ml LH组的绵羊卵母细胞成熟率显著高于添加0.075 IU/ml HMG组(79.8％vs70.0％,P＜0.05)。
(4)比较了Ionomycin+6-DMAP、Ionomycin+6-DMAP+ CB、Ionomycin+ CHX+ CB三种激活方案，三组都可以有效激活绵羊卵母细胞，其中以Ionomycin+6-DMAP+ CB的激活效果最好，囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP组、Ionomycin+ CHX+ CB组(35.0％vs31.6％vs26.5％,P＜0.05)。
(5)以SOFaa培养液为对照组，使用输卵管上皮细胞或卵丘细胞共培养系统对孤雌激活胚进行培养，研究不同培养系统对孤雌激活胚的影响。试验结果显示，三组卵裂率差异不显著(69.5％vs68.1％，68.4％，P＞0.05)，输卵管上皮细胞组获得的囊胚率最高，且显著高于卵丘细胞共培养组和SOFaa培养液组(32.6％vs28.5％vs23.1％，P＜0.05)。
(6)绵羊COCs的体外成熟时间为16～18h、19～21 h、22～24 h，成熟率随着成熟时间的增加而上升，但去核成功率呈现下降趋势，综合成熟率与去核率的结果，本试验数据表明绵羊IVM19～21 h为最佳去核时期。
(7)使用胞质内注射法(IM)进行注核，研究在注核后间隔0h、1.5 h、3h激活对绵羊核移植重构胚发育的影响。试验结果显示，绵羊卵母细胞注核后间隔3h激活，可获得较好的激活效果，其卵裂率69.8％与囊胚率24.5％均为最高。
(8)对比了G1/G2培养液和SOFaa-FBS培养液对绵羊体细胞核移植重构胚发育的影响。G1/G2培养液和SOFaa-FBS培养液的卵裂率与囊胚率差异均不显著(P＞0.05)，表明G1/G2培养液与SOFaa-FBS培养液支持绵羊重构胚发育到囊胚的能力相当，均支持重构胚早期的发育。
(1)采用抽吸法、切割法和综合法三种方法来收集绵羊卵母细胞。结果表明，使用切割法在每个卵巢收集到的COCs最多2.08枚/个卵巢，且成熟率显著高于抽吸法与综合法(61.4％vs51.5％vs56.4％，P＜0.05)。在绵羊卵母细胞的采卵方法中，切割法最为适合。
(2)在成熟液中分别添加0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml的EGF，结果表明添加10 ng/ml EGF组的COCs成熟率显著高于0 ng/ml和5 ng/ml组EGF的成熟率(78.8％vs68.1％，70.2％，P＜0.05)，但其成熟率与20 ng/ml EGF组差异不显著(78.8％vs79.8％，P＞0.05)，且比20 ng/ml EGF组的细胞成熟率低1％。本试验中添加20 ng/ml EGF，得到了较高的成熟率。
(3)在成熟液中分别添加10 ug/ml FSH+10 ug/ml LH和0.075 IU/ml HMG，结果表明添加10 ug/ml FSH+10 ug/ml LH组的绵羊卵母细胞成熟率显著高于添加0.075 IU/ml HMG组(79.8％vs70.0％,P＜0.05)。
(4)比较了Ionomycin+6-DMAP、Ionomycin+6-DMAP+ CB、Ionomycin+ CHX+ CB三种激活方案，三组都可以有效激活绵羊卵母细胞，其中以Ionomycin+6-DMAP+ CB的激活效果最好，囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP组、Ionomycin+ CHX+ CB组(35.0％vs31.6％vs26.5％,P＜0.05)。
(5)以SOFaa培养液为对照组，使用输卵管上皮细胞或卵丘细胞共培养系统对孤雌激活胚进行培养，研究不同培养系统对孤雌激活胚的影响。试验结果显示，三组卵裂率差异不显著(69.5％vs68.1％，68.4％，P＞0.05)，输卵管上皮细胞组获得的囊胚率最高，且显著高于卵丘细胞共培养组和SOFaa培养液组(32.6％vs28.5％vs23.1％，P＜0.05)。
(6)绵羊COCs的体外成熟时间为16～18h、19～21 h、22～24 h，成熟率随着成熟时间的增加而上升，但去核成功率呈现下降趋势，综合成熟率与去核率的结果，本试验数据表明绵羊IVM19～21 h为最佳去核时期。
(7)使用胞质内注射法(IM)进行注核，研究在注核后间隔0h、1.5 h、3h激活对绵羊核移植重构胚发育的影响。试验结果显示，绵羊卵母细胞注核后间隔3h激活，可获得较好的激活效果，其卵裂率69.8％与囊胚率24.5％均为最高。
(8)对比了G1/G2培养液和SOFaa-FBS培养液对绵羊体细胞核移植重构胚发育的影响。G1/G2培养液和SOFaa-FBS培养液的卵裂率与囊胚率差异均不显著(P＞0.05)，表明G1/G2培养液与SOFaa-FBS培养液支持绵羊重构胚发育到囊胚的能力相当，均支持重构胚早期的发育。